随着1929年青霉素被发现并投入临床使用^[1],越来越多的抗生素或抗生素类药物被发现或研发并造福现代医学。然而,伴随抗生素过度使用而来的不仅是各种感染被治愈,还有日渐增强的病菌多重抗生素耐药性（Multidrug resistant,MDR）^[2]。在青霉素被使用于临床医学不久之后,抗生素滥用现象逐渐出现;很多病原体的耐药性随之不断增强,很多超级细菌不断被分离和发现,如可以耐受青霉素酶抗性的青霉素衍生物甲氧西林（methicillin）^[3]的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）^[4]菌株。MRSA表现出对所有β-内酰胺类及其他抗生素的耐药性,这使得临床对于其引起的感染能选择的治疗手段非常有限。临床对于治疗MRSA感染多采用抗生素治疗或多种抗生素联用,不仅成效甚微,还不断加剧MRSA的耐药性。一方面对于治疗MRSA感染的方法越来越匮乏,另一方面MRSA的耐药性不断增强,这种超级细菌不断给予人类健康威胁。研究表明超级细菌带来的威胁可以通过小的抗菌肽来缓解甚至治愈^[5]。最近,小肽作为候选药物使用的趋势激增,因为它们提供了优于小分子药的显著优势^[6]。抗菌肽具有相对分子量小、耐热性较好、广谱抗菌性、不产生耐药性等优点,在面对抗菌素耐药性的威胁时,是有很有前景和临床研究价值的选择。本实验阐述了一种快速筛选、表达、纯化抗菌肽的方法,通过SLOPE方法将抗菌肽基因融合到一种耐热的CL7^[7]标签,克隆到大肠杆菌载体pET23a上和毕赤酵母表达载体pHBM905BDM及pPICZα上得到待筛选抗菌肽的表达载体。本就研究中构建了20个大肠杆菌载体和10个毕赤酵母表达载体;CL7标签促溶的同时,如同大部分抗菌肽一样,具有较好的热稳定性,给融合蛋白提供耐热性,表达上清经高温处理后,得以初步去除杂蛋白,而后进行Ni-NTA纯化,融合蛋白在镍柱上被高效且低成本的HRV 3C蛋白酶酶切过后,抗菌肽得以释放,进一步纯化得到目的抗菌肽。其中大肠杆菌表达系统中筛选纯化得到5种,其中毕赤酵母表达系统纯化得到一种抗菌肽。经抑菌圈测验和MIC检测,成功筛选纯化得到各2种和1种有抗菌活性的抗菌肽。在表达载体构建过程中结合SLOPE法合成目的蛋白快速构建表达载体。纯化过程则利用抗菌肽及融合CL7标签后融合蛋白的耐热性的特点简化纯化过程、降低纯化成本。大肠杆菌表达系统和毕赤酵母表达系统配合使用也增加此方法的普适性。