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轮状病毒感染在世界范围内导致婴幼儿以及仔猪的严重胃肠道炎病。轮状病毒性胃肠炎特征：通常是水样泻，并伴有呕吐，发烧的症状。轮状病毒感染常因脱水，水电解质紊乱而继发性死亡。轮状病毒危害最大的是对养猪业，只能通过预防的措施，因而努力生产安全而又有效的疫苗成为首要任务。最初研究主要集中在不同的G(VP7)血清型上，通过中和实验衡量，以表明交叉免疫在保护性上的重要作用。中和性抗体对外壳蛋白VP4和VP7的反应在对轮状病毒性腹泻的保护性是否有重要作用，一直很有争议。 在轮状病毒感染中，非结构蛋白的保护作用还没有被广泛的研究。但是，最近出现了一些关于这方面的研究。非结构蛋白在病毒的形态发生上起着重要的作用，是病毒的内毒素能导致幼龄鼠腹泻。人和动物轮状病毒的内毒素NSP4序列分析表明存在六种不同的基因型(A-F)。轮状病毒的非结构糖蛋白NSP4是一种细胞内受体，与瞬时性包膜的获得有关，作为一种亚病毒粒子，出芽进入内质网。NSP4也能导致细胞内钙离子浓度升高。 为了在真核细胞中表达NSP4基因，首先把编码Wa株轮状病毒NSP4蛋白的基因克隆到克隆载体pMD-18T上，然后用KpnI和BamHI酶切之后插到真核表达载体PVXI上，该基因就被整合到父代载体上。能表达NSP4蛋白基因的质粒就被构建成功了。具体步骤如下：第一步，根据基因库中已发表的猪轮状病毒NSP4基因的保守序列设计一段寡聚核苷酸含有启动子AUG和限制性酶切位点KpnI作为上游引物，和另一段含有终止子和限制性酶切位点BamHI作为下游引物。第二步，猪轮状病毒在MA104上繁殖并收获病毒，从病毒中提取总基因组，作为模板进行反转录，通过反转录聚合酶链氏反应，获得NSP4基因。应用标准的PCR技术扩增，使每一个NSP4产物都含有KpnI和BamHI两个酶切位点。然后将其插入pMD18-T载体，并测序鉴定，和双酶切鉴定。同源性分析结果发现，该株病毒的NSP4基因与OSU株的NSP4基因同源性为99.8％，它们的氨基酸同源性为99.4％。 将扩增的片断转移到PVXI的KpnI和BamHI酶切位点以获得能表达NSP4蛋白的重组质粒。将NSP4基因从质粒pMD18-T-NSP4上用KpnI和BamHI两酶切下来后与真核表达载体PVXI相连，通过测序分析和限制性内切酶酶切分析，成功构建了重组质粒PVXI-NSP4。用核酸免疫5—9周龄的BalB／c小鼠，将小鼠分成四组，第一组，注射100ug／只的载体PVXI，第二、三组分别注射同样剂量P-NSP4、P-VP7的质粒，最后一组注射P-NSP4、P-VP7