FAF1在胃癌细胞株中的表达及FAF1高表达对HGC-27细胞增殖及凋亡的影响

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目的:通过检测FAF1在不同分化程度的胃癌细胞株中的表达水平,筛选出FAF1表达最低的胃癌细胞株,通过慢病毒载体将FAF1整合入该胃癌细胞内,观察FAF1高表达后胃癌细胞的增殖以及凋亡的改变,以探讨FAF1在胃癌细胞中的表达,与胃癌细胞分化程度的相关性以及在胃癌发生发展中的作用。方法:分别用实时荧光定量PCR反应(quantitation real–time PCR, qRT–PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测FAF1mRNA及蛋白在人胃粘膜上皮细胞株GES–1及四种不同分化程度的人胃癌细胞株(高分化胃癌细胞株NCI–N87、中分化胃癌细胞株SGC–7901、低分化胃癌细胞株MGC–803,未分化胃癌细胞株HGC–27)中的表达情况,筛选出FAF1表达最低的胃癌细胞株(阴性对照组),分别感染空载体慢病毒颗粒(空载转染组)与重组FAF1慢病毒表达载体颗粒(FAF1高表达组),激光共聚焦显微镜察看细胞的转染效率,Western blot验证FAF1蛋白的表达情况,透射电镜察看细胞超微结构的改变,流式细胞仪检测细胞周期的分布以及凋亡情况,MTT检测细胞生长的情况。结果:第一部分FAF1在不同胃癌细胞株中的表达:与GES–1相比,NCI–N87、SGC–7901、 MGC–803, HGC–27中FAF1mRNA的表达水平均降低(0.76±0.06,0.61±0.03,0.50±0.05,0.40±0.03VS0.97±0.09,P<0.01);FAF1蛋白相对表达水平也降低(0.56±0.02,0.49±0.04,0.37±0.05,0.23±0.04VS0.66±0.04, P<0.01),并且随着分化程度的降低而降低,差异具有统计学意义。第二部分FAF1高表达对胃癌细胞HGC-27增殖及凋亡的影响:依据GFP的绿色荧光可判断细胞的转染效率为95%以上;与阴性对照组以及空载转染组比较,FAF1高表达组FAF1蛋白明显的高表达;阴性对照组与空载转染组的细胞膜均完整,细胞核正常,两者的超微结构无明显差别,而FAF1高表达组细胞的胞核裂解成碎片状,可以见到凋亡小体的形成;FAF1的高表达能够抑制人胃癌细胞HGC–27的增殖,促进细胞的凋亡,改变细胞周期的分布,与阴性对照组和空载转染组相比,FAF1高表达组细胞的倍增时间显著延长,细胞凋亡率显著提高(84.66%±5.92%vs4.60%±3.80%和7.32%±3.82%, P<0.05),G0/G1期细胞显著降低(46.43%±2.43%vs54.93%±3.5%和54%±0.3%, P<0.05),G2/M期细胞显著增多(29.78%±3.91%vs19.33%±3.82%和20.93%±2.46%, P<0.05),差异均具有统计学意义。结论:⒈与人胃粘膜上皮细胞株相比,四种不同分化程度的胃癌细胞株中FAF1mRNA及蛋白的表达水平均降低,并且是随着胃癌细胞株分化程度的降低而降低,说明FAF1在胃癌的发生发展中是一个抑癌基因,并且与胃癌的分化程度有关。⒉FAF1基因在体外参与人胃癌细胞株HGC–27增殖以及凋亡的调控:FAF1能够改变人胃癌细胞株HGC–27细胞周期的分布,抑制胃癌细胞的生长,加速胃癌细胞的凋亡,在胃癌的发生发展中扮演抑癌的作用。
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