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目的:构建编码TAT-IhC-DPTCE嵌合基因的原核表达载体pET28a(+)-TAT-IhC-DPTCE并大规模表达纯化,探讨以嵌合变应原TAT-IhC-DPTCE为疫苗对过敏性哮喘进行特异性免疫治疗的效果。方法:1、合成TAT cDNA片段、MHC-Ⅱ通路中的恒定链(invariant chain,Ii)的1~110个氨基酸残基(IhC1-110)的基因片段和编码屋尘螨Ⅰ类变应原ProDer p1中5个T细胞表位的嵌合基因片段(命名为DPTCE),用分子生物学方法分别构建嵌合基因TAT-DPTCE和TAT-IhC-DPTCE。将上述嵌合基因克隆入到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达重组载体pET28a(+)-DPTCE、pET28a(+)-TAT-DPTCE和pET28a(+)-TAT-IhC-DPTCE,用限制性内切酶进行酶切和测序验证;2、将上述重组载体转入E.coli BL21(DE3)菌株,用IPTG小剂量诱导表达DPTCE、TAT-DPTCE和TAT-IhC-DPTCE,优化条件后进行大规模表达、纯化;3、以屋尘螨变应原粗提液为致敏原,构建小鼠过敏性哮喘模型,分别以纯化的嵌合变应原DPTCE、TAT-DPTCE和TAT-IhC-DPTCE对哮喘小鼠模型进行特异性免疫治疗。镜检法检测了支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞数量。ELISA法检测BALF中IFN-γ、IL-13、IL-10和TGF-β的水平以及血清中变应原特异性IgE、IgG1和IgG2a抗体水平。制备肺组织病理切片,观察其病理变化。结果:1、成功构建了pET28a(+)-DPTCE、pET28a(+)-TAT-DPTCE和pET28a(+)-TAT-IhC-DPTCE原核表达重组载体;2、成功诱导出DPTCE、TAT-DPTCE和TAT-IhC-DPTCE嵌合变应原并纯化;3、免疫治疗效果:与哮喘组相比,各免疫治疗组BALF中EOS的数量显著降低(p<0.01),IFN-γ、IL-10和TGFβ的含量均高于哮喘组(p<0.01),IL-13水平均低于哮喘组(p<0.01);各免疫治疗组中血清抗原特异性Ig E和IgG1抗体明显低于哮喘组(p<0.01),而IgG2a抗体水平显著升高(p<0.01)。肺组织切片观察显示:各治疗组变态反应性炎症较哮喘模型组明显减轻,表现为炎性细胞浸润减少。对上述指标的分析发现,TAT-IhC-DPTCE的免疫治疗效果优于DPTCE及TAT-DPTCE(p<0.01)。结论:嵌合蛋白TAT-IhC-DPTCE、DPTCE和TAT-DPTCE哮喘小鼠模型均具有治疗效果,其中以TAT-IhC-DPTCE效果最佳。