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目的:比较分析来源于两种乳腺癌细胞株的硫酸乙酰肝素(heparan sulfate, HS)对人A375黑色素瘤细胞生长的影响及作用机制,进而探讨不同组织来源的HS链的抗癌活性。 方法:1、HS链的提取、纯化培养人乳腺上皮癌细胞 MDA-MB-231及MCF-7,收集汇合期培养液,DEAE-Sepharose-CL-6B离子交换色谱分析、透析、蛋白含量测定、硫酸软骨素酶化学降解、冷冻干燥。链霉蛋白酶降解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycan, HSPG)的核心蛋白,得到HS链。SDS-PAGE电泳分析,冷冻干燥备用。 2、HS链的体外抗黑色素瘤实验将 MDA-MB-231及 MCF-7型 HS链以不同浓度作用于人A375黑色素瘤细胞,倒置显微镜下观察用药前后受试细胞形态的变化;噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率;Annexin-V-FITC及PI双染法观察其对细胞凋亡的影响;活性检测法测定用药前后细胞中caspase-3及caspase-9酶活性的变化情况。 结果:1. HS链可致A375细胞变圆、漂浮、空泡、轮廓模糊,大剂量组(MCF-7型HS100μg/ml,MDA-MB-231型HS1000μg/ml)出现了大量的细胞碎片。2. MTT结果显示,不同浓度的HS均能抑制黑色素瘤细胞的生长和增殖,与对照组比较有显著差异(P﹤0.01);来源于 MCF-7细胞与MDA-MB-231细胞的HS链分别在100μg/ml与1000μg/ml时对细胞的抑制作用最强,作用72h后,最大抑制率分别为81.56%与62.63%。3.流式细胞术测定结果显示,HS诱导细胞凋亡增加。25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的MCF-7型 HS及250μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml的MDA-MB-231型 HS作用24h后,细胞早期凋亡率依次为10.32%、11.57%、17.52%及14.45%、12.25%、10.35%。4. caspase活性检测显示,MCF-7型HS作用于A375细胞24h后,促进了caspase-3及caspase-9的活化,与对照组比较有显著差异(P﹤0.05);MDA-MB-231型HS虽促进caspase-3的活化,但随着剂量的增加,对caspase-9活化的能力反渐降低。 结论:1.两种乳腺癌细胞株来源的HS均可抑制人A375黑色素瘤细胞的生长和增殖,诱导其凋亡。 2. HS诱导A375细胞凋亡,与诱导肿瘤细胞caspase-3及caspase-9的活化有关。 3.来源于MCF-7细胞的HS具有较强的抗黑色素瘤作用。