乙烯利对青春期SD大鼠生精细胞凋亡及性激素水平的影响

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背景近半个世纪来,不孕不育已经成为一个十分严重的社会问题,男性不育在所有不孕不育中高达50%,但是大部分不育患者原因不明,其中环境因素被认为是引起男性不育主要原因,并引发社会学者的极大关注。乙烯利是应用最为广泛的植物生长调节剂之一,可促进植物开花、果实成熟,主要用于提高植物产量和采摘后果实的催熟。在生产过程中存在大剂量违规应用现象,研究发现可在食物中大量残留。国外学者研究发现乙烯利可使蛋白磷酸化,引起细胞生物活性改变,国内学者发现乙烯利对生物的生殖系统、内分泌系统、免疫系统、神经系统均有影响,但目前未见对生物青春期雄性生殖系统影响的研究报道,因此本研究通对青春期雄性SD大鼠采用不同剂量的乙烯利并应用不同时间,观察体质量、睾丸细胞凋亡及性激素水平变化,探讨乙烯利对雄性大鼠的生殖毒性及性激素水平的影响,为青少年生长发育及青壮年的不育提供一定理论基础。目的建立接触不同剂量乙烯利的SD大鼠模型,观察大鼠一般生活状态、体重、血清性激素水平、大鼠睾丸组织结构的变化及生精细胞凋亡变化情况,探讨乙烯利对其生殖毒性及性激素水平的影响,以及对人体的安全性提供科学的理论依据,为青少年生长发育及青壮年的不育提供一定理论基础。方法随机取Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠96只随机分为四组:高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组,每组分别为24只。各实验组分别给予乙烯利2000 mg/kg、1000 mg/kg、500 mg/kg[约为乙烯利半数致死量(LD50)的1/2、1/4、1/8],对照组给予等量生理盐水。采用经口灌胃方法,连续灌胃,1次/d,每3d称重1次,根据体质量的变化调整给药量。每组分别在7d、14d、21d及停用乙烯利30天时处死6只。各组处死时测体质量后心脏穿刺抽血3ml,采血离心后血清置-20℃冰箱备测,将去掉被膜的睾丸称重后,经10%福尔马林固定后,根据常规方法制作成石蜡切片。采用化学发光免疫法(chemiluminescence immunoassay,clia)、测血清雌二醇(estrodiol,E2)、睾酮(testosterone,t)水平,睾丸切片经苏木素-伊红染色后光镜下观察:平均曲细精管直径(meantubulardiametar,mtd)。采用dna聚合酶和末端脱氧核糖核酸转移酶标记dna链断端的核酸(tdt-mediateddutpnick-endlabelingtunel)技术检测睾丸生殖细胞凋亡,高倍镜计算凋亡指数(apoptosisindex,ai)。所有数值均用平均数±标准差(±s)表示,使用spss20.0软件进行统计学分析,每一组间数值比较用单因素方差分析(anova),以p<0.05作为显著性检验标准。结果(同一时间点)1各实验组体质量、睾丸质量、mtd平均值、生殖细胞凋亡指数较对照组降低(p<0.05),其中高剂量组、中剂量组较对照组显著降低(p<0.01);高剂量组较中剂量组相比差异无统计学意义(p>0.05)。2在7天和14天时,高剂量组血清E2水平与中剂量组、低剂量组、对照组相比较降低,具有统计学意义(p<0.05);21天时高剂量组、中剂量组血清E2水平与低剂量、对照组相比差异有统计学意义(p<0.05);低剂量组与对照组相比,大鼠生殖血清E2无统计学意义(p>0.05)。3高剂量组、中剂量组血清t水平与低剂量组、对照组相比较降低,具有统计学意(p<0.05);高剂量组较低剂量、对照组相比具有显著差异,差异有统计学意义(p<0.01);低剂量组与对照组相比无统计学意义(p>0.05)。(同一剂量组)1与对照组相比,大鼠体质量、睾丸质量、mtd平均值随着乙烯利接触时间的延长而下降,生殖细胞凋亡指数随时间的延长而增加;单因素方差分析显示,乙烯利对大鼠体质量、睾丸质量增长、mtd平均值增长、生精细胞凋亡率有影响(P<0.05);2高剂量组、中剂量组大鼠血清E2、T水平随时间的延长,逐渐增高,但趋势较平稳,单因素方差分析显示,一定剂量乙烯利对血清E2和T水平有一定影响(P<0.05)。(停止应用乙烯利30天后)各实验组较对照组体质量、睾丸质量、睾丸MTD平均值、生殖细胞凋亡指数、血清E2和T水平无显著差别,逐渐恢复至接近正常水平(P>0.05)。结论乙烯利对大鼠有一定的生殖毒性作用,可引起睾丸组织学结构改变、性激素水平降低,增加生精细胞凋亡,导致生精能力降低,这可能是导致男性不育的主要原因之一。
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