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类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）是一种以慢性滑膜炎、骨质破坏和关节功能丧失为特征的高致残率的自身免疫性疾病。肠道细菌作为一个重要的环境因素能够影响类风湿关节炎的发病。乳杆菌是人体肠道中重要的益生菌属之一，然而目前并没有针对RA患者肠道中乳杆菌数量和种类的研究，我们研究RA患者肠道乳杆菌的数量和种类变化，有利于深入揭示乳杆菌对RA疾病发病的作用。有研究发现产气荚膜梭菌的含量与RA病情活动度相关，病情活动越严重的患者，产气荚膜梭菌的含量越高[1]。研究RA患者肠道梭菌对II型胶原诱导关节炎模型发病的影响，旨在研究梭菌对RA疾病病情进展的影响，为研究肠道细菌对类风湿关节炎疾病的影响提供帮助。方法：1、研究脾虚湿困型RA患者肠道菌群与RA关系选取脾虚湿困型RA患者和健康受试者，通过活菌培养计数和变性梯度凝胶电泳DGGE(denaturing gradient gel electrophoresis)分析两组样本微生物群落结构、同时进行主成分分析PCA（Principal Component analysis）、聚类分析UPGMA（Unweighted PairGroup Method with Arithmetic Mean）。2、研究益生菌乳杆菌与RA发病关系收集早期RA患者与健康受试者粪便样本，提取粪便样本基因组DNA，荧光定量PCR技术对粪便中乳酸杆菌进行定量检测。PCR扩增乳杆菌的16SrRNA，产物经变性梯度凝胶电泳分离，获得肠道乳杆菌变性梯度凝胶电泳图谱，分析RA患者乳杆菌丰富度、Shannon-Wiener指数、均匀度指标，研究RA患者肠道乳杆菌的多样性与健康受试者的差异。3、研究条件致病菌梭菌与RA发病关系SPF级DBA/1小鼠随机分为4组，每组6只，在注射II型胶原2周前，开始灌肠接种梭菌，灌肠持续5周，各组小鼠均在注射II胶原13周后处死，检测细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-23的血清浓度，观察记录关节指数评分及关节病理改变。结果：1.培养计数发现脾虚湿困型RA患者肠道菌群中双歧杆菌和脆弱类杆菌数量显著少于健康人（P<0.01）；DGGE图谱显示RA患者肠道菌群DGGE条带数目为16.0±1.05，健康受试者DGGE条带数目为22.8±3.12（P <0.01）；主成分分析、聚类分析显示两组之间有较大的差异。2.荧光定量结果显示RA患者乳杆菌含量：RA组为10.62±1.72copy/g，显著高于健康受试组8.93±1.60copy/g（P<0.05）。肠道菌群DGGE图谱示：与健康受试组（丰富度：5.80±1.27；Shannon-Wiener指数：1.28±0.31；均匀度：0.74±0.14）相比，RA组丰富度（7.47±1.06，P<0.01）、Shannon-Wiener指数（1.81±0.12，P<0.01）和均匀度（0.90±0.04，P<0.01）显著增高，测序结果显示唾液乳杆菌、惰性乳杆菌和瘤胃乳杆菌、黏膜乳杆菌的16SrRNA在RA组高表达。3.在初次免疫后13周，胶原诱导且接种梭菌组DBA/1小鼠发病率、每只小鼠发病肢体关节肿胀数、关节评分均高于胶原诱导组，但无统计学意义(P>0.05)；。II型胶原诱导且接种梭菌组TNF-α含量301.1±19.2pg/ml显著高于仅胶原诱导组239.7±59.9pg/ml（P<0.01）， II型胶原诱导且接种梭菌组IL-1β含量247.2±32.0pg/ml显著高于仅胶原诱导组190.0±55.0pg/ml（P <0.05）。结论：1．健康受试者与脾虚湿困型RA患者肠道菌群结构有明显差异，RA患者肠道菌群中双歧杆菌和脆弱类杆菌数量明显少于健康受试者。2．早期RA患者肠道乳杆菌的数量增加，群落结构发生改变，唾液乳杆菌、惰性乳杆菌，瘤胃乳杆菌和黏膜乳杆菌高表达。3.接种早期RA患者肠道梭菌不能直接诱发关节炎；接种早期RA患者肠道梭菌能够影响II型胶原诱导DBA/1小鼠关节炎发病，但影响作用不显著。接种梭菌联合胶原诱导能显著增加小鼠外周血中细胞因子TNF-α、IL-1β水平。