论文部分内容阅读
本文通过对甘肃甘南藏族自治州境内收集到的117株野生羊肚菌Morchella spp.宏观形态特征、显微结构特征和基于ITS片段的分子生物学研究,探讨了该地区野生羊肚菌的分类地位及其系统发育关系;同时运用生物学和统计学的研究方法,讨论了羊肚菌M.esculenta液体菌种生长动力学模型,主要研究结果如下:1、形态学观察(1)对收集到的117株野生羊肚菌Morchella spp.进行形态学观察,初步将其规划为10种,分别为肋脉羊肚菌M.costata(Vent.)Pers.,尖顶羊肚菌M.conica Pers.,黑脉羊肚菌M.angusticeps Peek.,小羊肚菌M.deliciosa Fr.,羊肚菌M.esculenta(L.)Pers.,普通羊肚菌M.vulgaris(Pers.)Boud.,宽圆羊肚菌M.rotunda(Fr.)Boud.,粗腿羊肚菌M.crassipes(Vent.)Pers.,褐赭羊肚菌M.umbrina Boud.和高羊肚菌M.elata Fr.。(2)经单孢分离纯化的羊肚菌Morchella spp.培养菌落在复合PDA培养基上均出现菌丝体颜色逐渐加深的现象,由最初的无色透明渐变为淡黄色,最终变为黑褐色;同时,菌丝分泌的褐色素使复合PDA培养基也变为黑褐色。(3)在数字式目镜显微成像仪下,羊肚菌Morchella spp.菌丝生长初期为无色透明,生长中后期呈现黄褐色透明,且表面光滑,菌丝呈“桥连状”或“竹节状”,并有分枝且交织成网;子囊近圆柱形,一般含有8枚孢子;孢子椭圆形,无色,平滑;侧丝细长,顶部稍粗。(4)羊肚菌Morchella spp.菌核呈现土黄色或黄褐色,仅从其菌核表面分辨不出有关羊肚菌的任何可识别信息。2、分子生物学研究(1)将初步依形态分类鉴定的10株羊肚菌(GN-M1、GN-M2、GN-M3、GN-M4、GN-M6、GN-M9、GN-M10、GN-M12、GN-M14、GN-M22)和另外6株未能在相关资料中查阅到且尚不能确定的羊肚菌菌株(GN-M17、GN-M19、GN-M25、GN-M27、GN-M31、GN-M32)进行分子生物学研究。经分子鉴定得知,16株供试羊肚菌共归纳为5种,分别为黑脉羊肚菌M.angusticeps(GN-M1、GN-M2、GN-M6、GN-M10),羊肚菌M.esculenta(GN-M3、GN-M4、GN-M9、GN-M12),高羊肚菌M.elata(GN-M14、GN-M22、GN-M17、GN-M19),粗腿羊肚菌M.crapssipes(GN-M25、GN-M31)和尖顶羊肚菌M.conica(GN-M27、GN-M32),并且这5种羊肚菌主要归类于黄羊肚菌类群(羊肚菌M.esculenta,粗腿羊肚菌M.crapssipes)和黑羊肚菌类群(尖顶羊肚菌M.conica,黑脉羊肚菌M.angusticeps,高羊肚菌M.elata)。(2)根据最大简约法(MP)和邻接法(NJ)构建的分子进化树得知,两种分子进化树拓扑结构基本相似,并且Bootstrap验证都有很高的支持率,说明其系统关系有很高的可信度,同时也说明本研究为该地区羊肚菌Morchella spp.的系统分类提供了较为准确的分子性状依据。3、生长动力学研究运用Monod模型、Logistic模型和1st Opt(First Optimization)软件对羊肚菌M.esculenta生长过程进行拟合试验。通过分析比较,最终选择Logistic模型和1st Opt拟合模型作为此次试验羊肚菌M.esculenta深层发酵生长动力模型,建立形式如下: