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由单胺氧化酶(MAO)活性异常增高导致的神经衰退类疾病如帕金森氏病等,已逐渐成为人类健康的巨大威胁。因此,MAO抑制剂因其在此类神经系统疾病中的治疗作用也越来越受到重视,纯天然、低毒副作用的MAO抑制剂已成为研究的焦点。在已报道的天然来源的MAO抑制剂,大多数都以植物作为来源,也有从霉菌的发酵产物中获取的,但尚未见关于乳酸菌代谢产物对MAO抑制作用的报道。干酪乳杆菌JH23是一株在前期研究中获得的具有抑制MAO活性的乳酸菌,本文对其具有活性的组分进行了分离和化学成分分析,为今后乳酸菌体内抗衰老的研究以及神经衰退疾病药物的开发提供参考。(1)将雄性老龄大鼠肝脏匀浆,利用差速离心法获得MAO,测定粗酶液的蛋白含量和酶活,计算单位质量蛋白的酶活。利用选择性抑制剂的作用,分别制备MAO-A和MAO-B。(2)用单因素法分析了不同培养时间、培养温度和接种量对Lactobacillus caseiJH23代谢产物抑制MAO效果的影响,并通过响应面分析法确定Lactobacillus caseiJH23产MAO抑制剂的优化工艺参数:培养温度32.5℃,培养时间21h,接种量3.5%,在此条件下测得发酵液对MAO的抑制率为71.53%。(3)通过对比不同有机溶剂的提取效果,选择乙酸乙酯作为提取溶剂。发酵液提取后获得的有机相,采用蒸馏水反复洗涤,以去除易溶于脂相而难溶于水相的杂质,合并水相部分。水相成分经处理冻干后,其对MAO-A和MAO-B的IC50值分别为1.69mg/ml和4.93mg/ml,与最初发酵液相比纯化了3.98倍。(4)经过名义分子截留量为1KD的膜透析后,发现具有MAO抑制活性的组分分子量小于1000D。因此选用Sephadex G-15分离水相组分,将通过凝胶柱分离的到的组分记作W1,W1对MAO-A和MAO-B的IC50值分别为0.327mg/ml和1.13mg/ml,比上柱前约纯化了4倍。(5)W1经过高效液相色谱,C18柱进一步纯化,将纯化得到的有效组分用红外(IR)、核磁共振(NMR)和MS-MS等方法进行结构分析,根据结果初步判断此物质为琥珀酸。再根据琥珀酸标准品的液质图谱对比,确定活性物质为琥珀酸。