牛双肌基因多态性分子标记研究

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MSTN基因又称GDF-8(growth differentiation factor 8,肌肉生长抑制素),是一种肌肉生长的负调控因子,属于TGF-β(transfoming grouth factor beta,转化生长因子β)超家族,在发育和成熟的骨骼肌中特异表达。MSTN基因的保守的功能区的碱基发生突变,该基因的表达产物失活,从而丧失抑制肌肉生长的功能,使肌肉过度发育和表达。 本文研究了我国南阳牛、秦川牛以及国外引入品种皮埃蒙特牛双肌基因的多态性及其与生产性状的关系,目的在于寻找牛瘦肉率的分子标记,从而为牛的育种提供一种新的途径和方法。实验以具有表型“双肌”性状的纯种秦川牛30头、南阳牛45头、皮埃蒙特牛35头为实验材料,对牛MSTN基因的第三外显子进行了PCR-SSCP分析,对具有SSCP多态性的片段进行了克隆和测序,找出了等位基因的多态位点,分析了牛双肌基因SSCP多态性与牛产肉性状之间的关系,结果表明: (1) 经PCR-SSCP分析,发现南阳牛第三外显子扩增片段对应的基因编码区存在多态性,该区域存在两种基因型AA和AT型,等位基因A和T的频率分别为0.9889、0.0111。 (2) 经PCR-SSCP分析,发现皮埃蒙特牛第三外显子扩增片段对应基因编码区存在多态性,表现出两种基因型AA型和AT型,A和T的基因频率分别为0.9857、0.0143。这与Mc等的实验结果一致。 (3) 经PCR-SSCP分析,发现在我国秦川牛MSTN基因扩增片段对应的第三外显子处不存在多态性。 (4) 南阳牛、皮埃蒙特牛、秦川牛A和T基因频率分析说明等位基因A在各个群体中占的比例较大,而等位基因的频率很小,几乎为0,这说明“双肌”基因在第三外显子处突变的几率很小。同时可看出皮埃蒙特牛具有较高的T等位基因频率,说明皮埃蒙特牛中双肌存在的几率较大。 (5)以南阳牛、皮埃蒙特牛为实验材料,分析MSTN基因第3外显子的SSCP多态性与体重性状的关系,经方差显著检验结果表明:MSTN基因外显子3的多态性与出生重、18月龄体重呈显著相关(P<0.05)。突变基因型AT和出生重、18月龄体重呈显著相关(P<0.05)。 (6)对南阳牛、皮埃蒙特牛具有SSCP多态性的片段进行了克隆测序,测序结果表明,MSTN基因第三外显子在938处发生了单碱基的突变:G→A,导致导致编码的氨基酸由保守的半胱氨酸突变为酪氨酸,导致MSTN蛋白失活。 (7)本实验首次在我国地方黄牛品种南阳牛中发现双肌个体。 (8)建立了牛双肌个体检测的PCR-SSCP方法。
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