研究目的:乳腺癌是最常见的恶性肿瘤,大约70%的乳腺癌是雌激素受体α(ERα)阳性。他莫昔芬拮抗雌激素是ER+乳腺癌患者的一种高效且常用的治疗方法。然而,对他莫昔芬的固有或获得性耐药性对ER+乳腺癌治疗提出了重大挑战,此外,内分泌耐药的潜在机制仍不清楚。近年来,在ER阳性乳腺癌的发生发展中,micro RNA(mi RNA)的作用瞩目剧增,越来越多的证据表明mi RNA的失调会影响他莫昔芬的敏感性,但mi RNA如何调节他莫昔芬的敏感性及mi RNA与ERα信号之间的串扰机制仍不清楚。已有研究表明,mi R-575参与多种恶性肿瘤的发生发展,然而其在乳腺癌中的报道较少,mi R-575对乳腺癌发生发展的作用和对他莫昔芬敏感性的影响尚不明确,所以,本文就mi R-575对ER阳性乳腺癌他莫昔芬敏感性的影响及其机制做深入研究。研究内容:通过Kaplan-Meier plotter分析mi R-575在乳腺癌患者中的表达水平及生存关系。检测mi R-575在不同乳腺癌组织及细胞系中的表达水平,通过体内体外实验探讨对乳腺癌细胞增殖及他莫昔芬敏感性的影响,探讨mi R-575与雌激素在ER阳性乳腺癌中的相关性,探索mi R-575的靶标及其靶基因调控机制,并阐明mi R-575调控他莫昔芬敏感性在ER阳性乳腺癌中的分子机制。研究方法:我们首先通过Kaplan-Meier plotter比较了具有不同mi R-575表达水平的乳腺癌患者的总体生存率。通过RT-q PCR确定mi R-575在乳腺癌组织和细胞系中的表达。构建稳转mi R-575过表达T47D细胞系,瞬转mi R-575 inhibitor以降表达mi R-575,通过一系列功能学实验验证mi R-575对ER阳性乳腺癌细胞增殖能力的影响。通过Ch IP和荧光素酶测定法分析了mi R-575启动子区域中ERα的结合位点。通过IP分析确定ERα与CDKN1B/p27,细胞周期蛋白D1或BRCA1的相互作用。分别通过蛋白质免疫印迹和免疫荧光分析蛋白质的表达水平和定位。最后,探讨了ER+乳腺癌细胞中的mi R-575-p27轴是否可以影响在体内体外对他莫昔芬治疗的肿瘤反应。研究结果:本研究通过Kaplan-Meier plotter分析了mi R-575在乳腺癌患者中的表达水平,发现mi R-575高表达的乳腺癌预后差。并且,发现与mi R-575低表达患者相比,mi R-575高表达的ER+乳腺癌患者的预后较差,但是,ER-乳腺癌患者与mi R-575表达水平的预后无关。另外,通过RT-q PCR方法,我们分析了20个原发性乳腺癌组织样品和不同乳腺癌细胞中mi R-575的表达。我们在大多数ER+乳腺癌中观察到mi R-575表达上调。mi R-575在ER阳性乳腺癌体内和体外实验中均可促进ER+乳腺癌的增殖。雌激素/ERα激活mi R-575表达。并探索出mi R-575的靶标为p27,进一步探讨p27与ERα的相互作用及对mi R-575表达水平的影响,以及BRCA1与ERα相互作用并受mi R-575调控。最后,通过靶向CDKN1B/p27,mi R-575的过表达降低了他莫昔芬的敏感性。ERα结合mi R-575启动子上调其转录活性,而他莫昔芬治疗后下调ER+乳腺癌中mi R-575的表达。此外,CDKN1B/p27通过抑制ERα核内分布作用及BRCA1与细胞周期蛋白D1的相互作用来拮抗ERα活性。研究结论:本研究揭示了ER+乳腺癌中的ERα-mi R-575-CDKN1B/p27反馈环,表明mi R-575可以用作ER+乳腺癌患者的预后生物标志物,以及他莫昔芬灵敏度的预测指标或潜在的靶标。