蛇毒中的类凝血酶属于丝氨酸蛋白水解酶，它的特点是能将血液中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白凝胶。由于其形成的纤维蛋白凝胶是非交联的，并极易为内皮系统或纤溶酶所降解，因此类凝血酶在临床上可以用于降低血液中纤维蛋白原的水平、改善血液的流动性，从而达到防治和治疗血栓类疾病的目的。 在对蛇岛蝮蛇类凝血酶已有的研究基础上，本论文的工作从以下三个方面开展： （一）利用金属螯合层析纯化组合分离纯化重组蛇毒类凝血酶。我们将大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶基因连接到表达载体pET-32a（+）上并转入大肠杆菌BL21（DE3）中，在胞内获得可溶性表达。在表达产物的纯化过程中，比较了两种分离纯化方法的不同组合，重组类凝血酶经过组合一即金属螯合层析、疏水层析、Source 15Q强阴离子交换层析纯化后纯度能达到88％，产物回收率为37.9％，纯化倍数为26；而经过方案二中各步骤即金属螯合层析、DEAE弱阴离子交换层析、Source 15Q强阴离子交换层析纯化后，纯度只能达到75％，产物回收率和纯化倍数分别仅为7.3％，15。 （二）本文设计合成了抗重组类凝血酶的鸡卵黄免疫球蛋白抗体（IgY）的亲和配基，考察了免疫亲和层析分离纯化重组蛇毒类凝血酶的效果。将通过免疫获得的鸡卵黄免疫球蛋白经过PEG-6000三步沉淀法粗提后，可得到4.0mg／ml鸡卵黄的总IgY，再经过特异性免疫亲和柱纯化后，纯化倍数能达到200左右。表达产物的可溶组分经过疏水层析、免疫亲和层析、Source 15Q强阴离子交换层析三步纯化后，可获得纯度达到80％左右的目的融合蛋白，活性回收率为34.8％，纯化倍数为29.5。 （三）天然蛇毒中类凝血酶的分离纯化及酶学性质研究。采用SP阳离子交换层析、凝胶过滤、阴离子交换层析分离纯化蛇毒，得到两种有凝结活性的单一组分。酶Ⅰ的分子量约为34kDa，Km为3.4×10^-4M，Vmax为6.26×10^-4mM／s；酶Ⅱ的分子量约为38kDa，Km为5.7×10^-4M，Vmax为7.36×10^-4mM／s。比较了五种不同的抑制剂的抑制效果，就酶Ⅰ而言，4-氨基苯甲醚为最强的抑制剂，蛇毒重组类凝血酶的分离纯化及亲和配基的制备而盐酸肌为最弱抑制剂，而对于酶H，4一氨基苯甲醚为最强的抑制剂，盐酸肌为最弱抑制剂。