基于愤怒诱发实验探讨肝失疏泄状态的情绪反应特点及蛋白组学差异

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中医传统理论认为,“肝主疏泄”具有调畅情志的功能。肝主疏泄,是指肝气具有疏通、畅达全身气机,进而促进精血津液的运行输布,协调脾胃之气的升降,促进胆汁的分泌排泄,以及舒畅情志的作用。肝的疏泄的机制在于调畅气机,气机通畅则促进全身血液运行,而气血是精神情志活动的物质基础,因此肝主疏泄功能正常,则精神愉快,情志舒畅。而早在《内经》中便有关于肝与情志怒之间关系的记载,如《素问·阴阳应象大论》云“东方生风,风生木,木生酸,酸生肝……在志为怒”明确指出了肝在志为怒,说明情志怒的发生与肝的关系尤为密切。近年来,随着研究技术的不断革新。对于“肝主疏泄”调畅情志功能的研究不断深入。目前有关“肝主疏泄”对“怒”情志调节的研究涉及理论研究与实验研究,但研究重点在动物实验,研究多从病理学角度入手,从病理机制推导生理功能,缺乏对生理状态下“肝主疏泄”调畅情志功能机制的探索。本研究以健康在校女大学生为研究对象,通过身心健康状况调查问卷与体格检查等方式筛选健康女性被试者,根据神经质的评分进行分组,以“怒”情志为代表,借助心理学愤怒情绪视频诱发实验、皮质醇觉醒反应实验及同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术探索生理状态下“肝主疏泄”调畅情志功能的特征。目的:1、高低神经质女性愤怒情绪诱发的差异。2、高低神经质女性愤怒情绪诱发前后生理、心理学差异。3、高低神经质女性蛋白组学差异。4、探索“肝主疏泄”调畅情志的功能特征。方法:1.健康被试者的筛选依据世界卫生组织颁布的有关健康的定义,在北京中医药大学在校女大学生中发放身心健康状况调查问卷并组织被试者在北京中医药大学东方医院进行体检。其中问卷包含了贝克焦虑量表、贝克抑郁量表、艾森克人格问卷简式量表中国版以及课题组自拟的健康状况调查问卷。最终筛选出常规体检合格(无明显器质性躯体疾病);无情志疾病,无重大躯体疾病;近2个月内未发生重大不良生活事件;自愿参与者,纳入为本次研究的被试者。应用EXCEL2010软件把调查数据录入并保存,应用SPSS20.0软件进行数据的统计分析。2.愤怒情绪诱发实验组织被试者月经前的1-7天进行愤怒情绪视频诱发实验,视频为北京师范大学心理学院周仁来教授课题组建立的“中国情绪视频库”中的愤怒情绪视频,情绪刺激的强度为5-6分,时长为3分钟。在愤怒情绪视频观看前后,被试者填写情绪主观评定问卷,并采集被试者的唾液样本,应用EXCEL2010软件把调查与实验的数据录入并保存,应用SPSS20.0软件进行数据的统计分析。3.皮质醇觉醒反应实验在被试者月经的黄体中晚期,与被试者协商选取其时间方便的晨起进行唾液采集,唾液采集的时间为被试者觉醒即刻的0min、30min、45min以及60min。检测其相应时点的唾液皮质醇水平,通过EXCEL2010进行检测结果的数据导入并保存,SPSS20.0软件对数据进行统计分析。4.基于iTRAQ技术的蛋白组学分析通过iTRAQ技术筛选出高、低神经质组健康女性样本检测中含量差异倍数达到1.2倍以上,且经统计检验其P-Value≤0.05时,看作两组的显著差异蛋白。分析这些显著差异蛋白在Gene Ontology数据库中的的分布情况,进而明确这些差异蛋白的分子功能、所处的细胞位置以及参与的生物过程。结果:1.健康被试者的筛选本次研究共发放问卷270份,回收问卷232份,回收率为85.9%。自愿且符合入组条件的46例。被试者年龄为18-32周岁。平均年龄23.50±3.46周岁。神经质≤1分为低神经质组共21人,神经质≥6分为高神经质组共25人。高神经质组焦虑抑郁评分高。且高神经质组较低神经质组躯体不适频数更高,特别是善太息、目涩、胸部满闷等典型的肝疏泄不足的表现。低神经组情绪平和,躯体不适出现的频数少,肝疏泄功能较好。2.愤怒情绪诱发实验在愤怒情绪诱发前,高神经质组的愤怒情绪评分较低神经质组高,在愤怒情绪诱发状态下,高神经质组激发的愤怒情绪幅度小。此外,愤怒情绪视频诱发实验前后的唾液皮质醇的水平显示,高神经质组的唾液皮质醇水平高,波动幅度相对大。3.皮质醇觉醒反应实验高、低神经质组均在觉醒后的30min内出现了唾液皮质醇水平的急剧升高趋势,其中高神经质组在30min达到峰值,这一趋势符合皮质醇觉醒反应实验的变化规律,此外,高神经质的唾液皮质醇水平起点高,各时段波动幅度大。4.基于iTRAQ技术的蛋白组学分析①高、低神经质组共鉴定到了 2389种蛋白质。其中两组共有410种差异蛋白,两组比较在高神经质组中有236个上调蛋白,174个下调蛋白。②通过超几何检验出的高、低神经质组差异蛋白在高组显著富集的GO通路中涉及参与的生物过程主要为单胺类神经递质的生物合成及应答通路,如腺苷酸环化酶活性多巴胺受体信号通路、含儿茶酚复合物生物合成过程、肾上腺发育、多巴胺代谢过程、儿茶酚胺合成过程、对单胺的刺激应答、对儿茶酚胺的刺激做出反应、细胞对儿茶酚胺的刺激做出反应等。在有关单胺类神经递质的生物合成及应答相关的通路上富集的差异蛋白,主要 包 括 sp|P59768|GBG2_HUMAN、tr| J3QRP6| J3QRP6_HUMAN、tr|Q4W5L2|Q4W5L2_HUMAN、sp|P02647|APOA1_HUMAN、tr|Q762B6|Q762B6_HUMAN,tr | Q762B6| Q762B6_HUMAN这6种蛋白。其中两组对比高神经质组sp| P59768|GBG2_HUMAN、tr|J3QRP6_J3QRP6_HUMAN、tr|Q4W5L2|Q4W5L2_HUMAN、sp|P02647|APOA1_HUMAN、tr | Q762B6| Q762B6_HUMAN 蛋白显著上调,tr | Q762B6_Q762B6_HUMAN 蛋白显著下调。结论:①高低神经质人群的“肝主疏泄”调畅情志的功能存在差异,高神经质组人群情绪表现为焦虑、抑郁,烦躁易怒,遭遇负性事件时情绪不易恢复,善太息、疲乏无力、怕冷、眼部不适、胃脘不适等躯体不适出现频数高。在愤怒情绪诱发状态下,高神经质人群愤怒情绪波动小,GC水平高,波动较大,推测高神经质组人群自我的主观情绪感受“麻木”,激发了较大幅度的GC波动。提示高神经质组处于肝疏泄不足所导致情志调节不畅状态的人群。②疏泄不足人群的唾液皮质醇水平起点高,各时段波动幅度大,晨起后唾液皮质醇消耗多,提示该组人群的基础应激水平相对亢进。③肝疏泄不足,导致的情志调节不畅与单胺类神经递质的代谢相关的通路关系密切,其中与单胺类神经递质代谢相关通路上的GBG2、J3QRP、Q762B6、Q4W5L2、APOA1蛋白表达上调,NROB1表达下调有关。
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