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背景及目的肾小管间质病变是糖尿病肾病（Diabetic nephropathy，DN）进展为终末期肾脏病（ESRD）的重要病理基础，细胞外基质（ECM）在肾间质过量堆积是其基本病理特征。目前认为肾间质ECM主要由肌成纤维细胞（MyoF）分泌。研究发现在病理条件下，肾小管上皮细胞可发生上皮细胞—肌成纤维细胞转分化（Epithelial-myofibroblast transdifferentiation，EMT），即丧失原有的上皮细胞表型特征，而获得MyoF的新特征，是肾间质MyoF的重要来源。有研究报道，在单侧输尿管梗阻（UUO）模型大鼠，EMT参与了肾间质纤维化的发生与发展。但在DN肾小管间质病变进程中，是否也存在上述EMT过程尚不清楚。转化生长因子-β1（TGF-β1）是EMT的重要启动和促进因子。TGF-β1的生物学作用广泛而复杂，具有正面和负面的多样效应。单纯抑制TGF-β1这一上游因子，则可能在抑制EMT的同时引起其他不利的负效应。于是，寻找作用更特异、有效的下游因子或环节，成为新近研究的关注热点。整合素连接激酶（Integrin-linked kinase，ILK）是新近发现的一种与整合素细胞内区域结合的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，已有研究证实ILK是整合素、生长因子、MAPK及Wnt等多个信号传导通路的交叉点和重要效应物。以往对ILK的研究主要集中在肾小球，近年在UUO模型大鼠和体外细胞培养的研究结果表明，肾间质ECM的聚积与ILK表达正相关；ILK介导TGF-β1／Smad信号传导通路，可能参与肾小管EMT过程。然而，在DN肾小管上皮细胞中ILK表达情况及其与EMT关系，目前所知尚少。人们一直在努力寻找能有效阻抑肾间质纤维化的药物。大黄是临床治疗慢性肾脏病处方使用频率很高的一味中药。大黄酸（Rhein）是从大黄蒽醌衍生物中分离出的一种前体组分，为大黄的主要有效成分。临床与实验研究结果均表明大黄酸能有效减缓慢性肾脏病进程，具有肯定的肾脏保护作用。但大黄酸对DN的小管间质病变及EMT过程的作用、影响，尚少见报道。本研究拟从糖尿病大鼠模型和体外细胞培养两个实验层面，采用反映上皮细胞表型特征的E钙粘素（E-Cadherin）、反映MyoF表型特征的α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和作为ECM成分的纤维连接蛋白（FN）等指标，观察在DN小管间质病变中，肾小管上皮细胞转分化与ILK表达的改变，以及EMT与ILK的关系；并用大黄酸干预处理，观察大黄酸对上述过程的影响。旨在从EMT这一新途径，探讨DN病变进展新机制，寻找DN防治的新靶点。方法（一）动物实验部分雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（N组，n=12）、糖尿病模型组（D组，n=12）和糖尿病大黄酸干预组（R组，n=12）。采用腹腔内一次注射STZ 55mg·kg-1诱导糖尿病模型。大黄酸组大鼠于糖尿病成模后，给予大黄酸100mg·kg-1·d-1灌胃。分别于第8、16周末，每组随机选取6只大鼠，留24小时尿测定尿蛋白排泄量；处死大鼠，心脏取血测血清肌酐（SCr）、血甘油三酯（TG）和胆固醇（CH）；肾脏原位灌洗后，取肾组织：石蜡切片，HE和Masson染色观察肾小管间质损害及纤维化；免疫组化法检测肾小管上皮细胞E-Cadherin、α-SMA、FN与ILK的表达；免疫印迹方法检测肾组织E-Cadherin、α-SMA、FN与ILK蛋白的表达。（二）细胞实验部分应用细胞培养技术，按下列实验条件分组培养人近端肾小管上皮细胞（HK-2）：空白对照（N组），低糖（5.5mmol／L）DMEM培养基；高糖（D组）葡萄糖浓度30mmol／L；高糖+大黄酸25μg／ml（R-25组）；高糖+大黄酸50μg／ml（R-50组）；高糖+大黄酸100μg／ml（R-100组）。分别于24h、48h、72h收集各组细胞，免疫印迹方法检测E-Cadherin、α-SMA、FN与ILK的蛋白表达。结果1．D组和R组糖尿病大鼠的尿蛋白量、血清肌酐值与肾小管间质损伤指数、间质胶原相对面积等均随病程进展而增加，明显高于同期N组（P＜0.01）；大黄酸（R组）能减轻上述病变。16周时R组较同期D组，其肾脏保护作用更显著（P＜0.05）。2．D组和R组糖尿病大鼠肾小管上皮细胞E-Cadherin表达随病程逐渐减少（P＜0.05），而α-SMA、FN表达逐渐增加，均较同期N组有显著差异（P＜0.05，P＜0.01）；同时，ILK表达也明显上调（P＜0.05）。ILK与E-Cadherin呈负相关（rs=-0.82，P＜0.05），与α-SMA、FN呈正相关（rs=0.83，P＜0.05；rs=0.94，P＜0.01；）。大黄酸干预可改善上述变化，16周时R组较同期D组各指标的改善呈现显著差异（P＜0.01）。3．高糖环境下HK-2细胞（D组）与N组比较，E-Cadherin的蛋白表达减少（P＜0.05）；ILK、α-SMA、FN蛋白的表达增多（P＜0.05）。经大黄酸处理后的各R组与D组比较E-Cadherin的蛋白表达上调（P＜0.05），α-SMA、FN及ILK、蛋白表达下调（P＜0.05），且与大黄酸呈剂量、时间依赖性关系（P＜0.05）。结论1高糖环境下HK-2细胞与糖尿病大鼠肾小管上皮细胞，E-cadherin表达减少，α-SMA、FN表达增加，表明DN肾小管间质病变进程中，存在肾小管上皮细胞转分化（EMT），成为MyoF的重要来源。2在DN病理状态下，肾小管上皮细胞呈现ILK高表达，且与EMT过程高度相关；ILK参与介导了DN的EMT过程，在其中起着正向调控作用。3大黄酸可下调DN肾小管上皮细胞ILK表达，阻抑EMT，减轻DN的肾小管间质病变，这可能是大黄酸治疗DN的重要作用机制之一。大黄酸具有治疗DN的潜能与前景。