目的:应用免疫学方法筛选猪囊尾蚴cDNA文库,以寻找新的编码猪囊尾蚴病诊断抗原候选分子基因。方法:采集猪囊尾蚴患者血清,用大肠杆菌裂解液吸附去除其中的大肠杆菌抗体:免疫学筛选猪囊尾蚴cDNA文库;在2次复筛阳性的克隆中选取9个进行插入片断的核苷酸序列测定,结果送GenBank进行同源性分析。根据序列测定结果,选取其中四个具完整开放阅读框架的基因,设计合成引物,进行PCR扩增,并将其克隆入PMD-18T载体,然后再亚克隆至原核表达载体PET28a(+)中。经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果:用抗血清初筛了约6.1×10~3个重组噬菌体,得到42个阳性克隆,对其中的18个克隆进行复筛,得到9个持续阳性反应克隆。选取其中有插入片段的4个重组噬菌体单克隆进行序列测定,获得的序列经GenBank进行同源性比较后发现4条序列均为未知的猪囊尾蚴序列,其中编号为5H克隆的插入序列与编码日本血吸虫核糖体样蛋白的基因具高度同源性,其具有一个528bp的完整开放阅读框。PCR法扩增该基因,克隆入载体PMD-18T,再亚克隆入原核表达载体PET28a中,所形成的质粒经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段。IPTG诱导后进行SDS-PAGE,发现在约24KDa位置出现一条表达条带,且随着表达时间的推移,表达产物量增大。Western-blot鉴定结果表明阳性病人的血清可特异性识别此条带。结论:从猪囊尾蚴cDNA文库中筛选到一批血清学阳性的编码猪囊尾蚴蛋白质的CDNA分子,并对其中的5H进行了克隆、诱导表达和初步鉴定,为进一步将其用于免疫诊断奠定了基础。