太湖水华蓝藻中藻蓝蛋白的富集分离

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太湖水华蓝藻主要由铜绿微囊藻、水华鱼腥藻和水华束丝藻等藻类组成,是太湖流域的夏季主要污染物之一。从水华蓝藻中提取蛋白质、多糖等有价值物质,为治理提供了一条变废为宝、提高综合治理效益的新的有效途径。藻蓝蛋白是蓝藻捕光色素复合体中重要的成分之一,可作为天然色素、荧光标记物,还具有一定的药用价值。本论文以太湖水华蓝藻为对象,以其中的藻蓝蛋白为提取目标,系统研究了富集分离过程,主要研究内容如下:1.采用单因素扫描和全因子设计响应面优化方法获得薄层层析微囊藻毒素MC-LR、MC-RR的展开剂体系,溶剂比例为三氯甲烷:甲醇:水=65:25:2。MC-LR、MC-RR的展开斑点通过碘蒸气显色的目测检出最低浓度为1 mg·L-1。薄层色谱扫描法捡出的MC-LR、MC-RR最低浓度为0.00 1mg·L-1。MC-LR、MC-RR的色谱扫描峰面积与其浓度在0.05-10 mg·L-1浓度范围内呈线性关系,检测准确度达95%以上。2.破碎蓝藻细胞的最适方法为反复冻融法,所需的最佳条件为:每0.1 g蓝藻细胞(干重)加15 mL水,于-20℃和37℃间反复冻融5次,获得的蛋白含量为14%。蛋白沉淀的最适经典方法为硫酸铵盐析沉淀法,条件为两步盐析,破壁上清液先用20%饱和度的硫酸铵盐析,离心取上清。然后再用60%饱和度的硫酸铵盐析,离心取沉淀,复溶后蛋白得率为78.32%,光谱纯度达到0.32。盐析后的蛋白质溶液经薄层层析检测出微囊藻毒素MC-LR,MC-RR含量很低。3.静态吸附实验表明实验室自制的JDN-3型树脂在吸附蛋白和选择性吸附藻蓝蛋白的性能上较市售的717,732树脂和羟基磷灰石好。JDN-3型树脂性能较稳定,有良好的重复使用性能。离子交换层析实验表明用0.2 mol·L-1NaCl以0.5 mL·min-1的流速洗脱能将吸附在JDN-3型树脂上的藻蛋白较为充分的解析下来,并能提高藻蓝蛋白的光谱纯度。
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