本论文研究了巯基亚硝基化作用对免疫、炎症反应的中心调控因子NF-κB活性的影响,及对其相关信号通路的负调控作用。本研究采用300gM的NO供体硝普钠(SNP)孵育PC12细胞8h,在细胞活力保持在75%以上且不产生明显凋亡的情况下,建立了一个较高NO浓度的微环境来诱导细胞内蛋白质发生巯基亚硝基化修饰。生物素转化法结合western blot的技术检测到PC12细胞内大量的蛋白发生了不同程度的巯基亚硝基化修饰。p65亚基为NF-κB蛋白家族中分布最为广泛的功能蛋白之一。采用293T细胞瞬时转染p65重组质粒,使NF-κB p65亚基过量表达。经300μM的SNP孵育p65过表达细胞8h后,生物素转化法、链酶亲和素亲和纯化及western blot相结合的方法检测到NF-κB的p65亚基发生了巯基亚硝基化修饰。双荧光素酶报告基因检测结果显示p65的巯基亚硝基化修饰显著抑制了NF-κB的转录活性。以上结果表明SNP诱导细胞内大量蛋白发生了巯基亚硝基化修饰,其中p65亚基的巯基亚硝基化修饰抑制了NF-κB的转录活性,从而为NO失活NF-κB信号通路,降低炎症反应提供了新机制。