渗透剂对蛋白质稳定性和折叠复性的影响

来源 :天津大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jxt1
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文主要考察甜菜碱和海藻糖两种渗透剂对蛋白质稳定性、蛋白质折叠复性和蛋白质分子相互作用的影响,以阐明这些渗透剂在蛋白质折叠复性中的作用,进而应用于辅助基因重组包含体蛋白质的复性。 首先,以溶菌酶为模型蛋白质,应用荧光光谱考察了化学变性剂盐酸胍作用下,甜菜碱或海藻糖对天然态溶菌酶去折叠过程中内源荧光的影响。以线性外推模型得到了溶菌酶去折叠过程的热力学参数。结果表明,甜菜碱或海藻糖均可以提高盐酸胍诱导溶菌酶去折叠过程的自由能变化,增大天然态溶菌酶的稳定性。 第二,以完全变性还原溶菌酶为模型蛋白质,考察了添加甜菜碱或海藻糖对其复性的影响。对于甜菜碱而言,随添加浓度逐步升高至2 mol·L-1,溶菌酶的复性收率也逐步升高;对于海藻糖而言,存在最佳的浓度0.2 mol·L-1使得溶菌酶的复性收率最高。以蛋白质折叠与聚集的三级竞争反应动力学模型分析了变性还原溶菌酶复性过程的宏观动力学行为。甜菜碱可以促进变性溶菌酶折叠而促进复性。由于海藻糖对变性态蛋白质具有稳定作用,较低浓度的海藻糖(<0.2 mol·L-1)可以抑制变性态溶菌酶的聚集,提高复性收率;但较高浓度的海藻糖(>0.2 mol·L-1)会导致溶菌酶的折叠减慢,从而使复性收率降低。 第三,为了分析渗透剂在蛋白质复性过程中对蛋白质分子间相互作用的影响,利用自相互作用色谱分析了两种pH下,氯化钠和盐酸胍体系中甜菜碱、海藻糖和精氨酸对溶菌酶分子相互作用的影响,得到了不同条件下溶菌酶的第二维里系数。所有盐酸胍浓度下,随甜菜碱或海藻糖浓度的逐渐增大,溶菌酶的第二维里系数均逐渐增大。但溶液中不含盐酸胍或含有0.05 mol·L-1的盐酸胍时,精氨酸浓度的增大会导致溶菌酶的第二维里系数降低;当盐酸胍浓度超过0.5 mol·L-1时,精氨酸浓度增大则会导致溶菌酶的第二维里系数略有升高。这一结果表明渗透剂和精氨酸对蛋白质分子之间相互作用的影响不同。 最后,通过培养基因工程菌得到了以包含体形式表达的大肠杆菌苹果酸脱氢酶,作为模型蛋白质考察寡聚蛋白质及包含体的复性过程。结果显示,随甜菜碱浓度的升高,复性后苹果酸脱氢酶的比活增大;而海藻糖则出现最佳浓度(0.5 mol·L-1)使得复性效果达到最高;在盐酸胍浓度较高(0.4 mol·L-1)的复性体系中,加入合适浓度的甜菜碱或海藻糖仍可有效促进苹果酸脱氢酶的复性。
其他文献
学位
本研究以东乡野生稻(O. rufipogon Griff.)(以下简称“东野”)为供体父本,栽培稻协青早B (O. sativa sp. indica Kato)为母本及轮回亲本,构建了BC_1F_(10)回交重组自交系群体。利用这一群体,我们对8个水稻产量相关性状进行了遗传分析,包括穗总粒数、穗实粒数、单株有效穗数、千粒重、结实率、穗长、着粒密度和单株产量。此外,我们还对产量相关性状进行了QTL
当代,锂离子电池已广泛应用于各种先进科技中,成为最具前景的新型能源。然而,目前商用的锂离子电池石墨类负极材料的理论容量只有372 mAh/g。为了满足科技发展的需求,广大学者们正致力于研发具有更高能量密度的新型材料来取代石墨类材料。硅碳复合材料结合了硅系材料和碳基材料双方的优势,已成为新型负极材料的理想选择。其中,硅系材料提供了高能量密度,碳基材料提供了稳定的结构、高导电性和额外的储锂空间。本文使
本文利用乙醇—水—SiO2体系中形成的吸附层作为纳米反应器制备了Ag/SiO2纳米复合材料。论文首先综述了纳米Ag和纳米复合材料的性能和应用,对纳米复合材料的制备方法按照是否
本文介绍了积碳结焦对食品企业带来的影响。简述了干冰清洁的工作原理,各种优势以及国内外的应用情况。 本课题来源于江门达能饼干有限公司(简称JDB)。这几年,江门达能饼干
我国西部盐湖蕴含丰富的镁资源,由于技术等的限制,镁资源的利用率很低,研究开发高品质镁质产品(如活性氧化镁)是高效利用盐湖镁资源的重要途径,具有重要的经济和社会意义。活性