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番茄灰霉病,由灰葡萄孢菌引起,是番茄生产的一种严重的病害。粉红粘帚菌是灰葡萄孢菌的拮抗微生物。为了研究粉红粘帚菌诱导番茄抗性的机制,本研究设置了4个处理,包括灰霉病菌处理(处理1),粉红粘帚菌处理(处理2),灰霉病菌和粉红粘帚菌分别处理(处理3),粉红粘帚菌和灰霉病菌分别处理(处理4),同时以清水为对照处理番茄叶片。研究中分析7种防御酶(PAL,PPO,POD,SOD,POX和LOX)活性和第二信使(NO和H2O2)的变化规律。与对照组相比,4种情况均能够诱导这些防御酶的高活性和高水平的第二信使NO和H2O2。而经灰霉病菌和粉红粘帚菌共同处理(处理4)的番茄叶片中出现了两个高水平表达的蛋白,即LEXYL2(-木糖苷酶),简称为“Lexyl2”和ATP合酶CF1亚基(ATP合酶CF1的亚单位),简称为“atpA”。atpA基因表达水平(番茄叶治疗C.rosea和接种灰霉病菌)在表达高峰时远比Lexyl2基因表达水平高。为了确定atpA蛋白在介导防御中的功能,我们通过农杆菌介导的叶盘法转化,将atpA基因转化烟。对转基因烟草植株进行Real time-PCR, PCR, RT-PCR,Southern杂交,序列分析, Northern杂交和组织学分析,证实了atpA基因在转基因烟草植株中得到了高水平表达。在处理A(转基因植物与灰霉病菌处理),处理B(转基因植物用蒸馏水处理)和治疗C型(带灰霉病菌处理非转基因植物)的烟草叶片中,我们检测到4中防御相关酶(PAL, PPO, POD和SOD)活性和第二信使(NO, H2O2, O-2)的变化。相较于处理B, C而言,处理A的烟草叶片中出现了增加的防御酶(PPO,POD和SOD)活性和明显增加的第二信使(NO, H-2O2, O2)浓度。尤其是在处理A的烟草叶片中,生理指标显示出显著的高水平。在处理A, C中,作为植物防御应答相关的重要信号的致病相关蛋白PR1被高水平表达出来。结果表明,这种蛋白在处理A,B中表示出上调表达,尤其是处理A中更加明显。Ca2ATP酶和Ca2Mg2ATP酶在处理A,B中也表现出了上调表达,尤其是在处理A中较为明显。相似的结果也可以在叶绿素含量的测定中被观察到。用灰霉病菌接种转基因植株的结果表明,转基因植株出现迟缓和低程度的过敏反应,而葡萄孢菌处理的非转基因植株却表现出急促且强烈的过敏反应。结果表明,粉红粘帚菌很又到了番茄对灰霉病的抗性,其中atpA基因为诱导抗性中的关键基因,转atpA基因的烟草有着明显的灰霉病抗性.