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口腔粘膜鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)的侵袭与转移是影响其预后的主要因素,有关OSCC侵袭转移的机制尚未完全阐明。近年来的研究表明,微小RNA(microRNA,miR)参与癌细胞的侵袭和转移;其中,miR-21-3p、miR-18a-3p、miR-210-3p、miR-155-5p、miR-181a-3p、miR-19a-3p是与口腔癌发生发展有关的肿瘤相关miR(Onco-miR),但对这些Onco-miR的编辑和成熟研究甚少。双链RNA编辑酶1(Adenosine deaminases acting on RNA1,ADAR1)可以与DICER形成异体二聚体促进miRNA的成熟,Onco-miR通过转录后调控机制调节癌细胞的生物学特性。本课题在探讨ADAR1在口腔癌中表达水平基础上,进一步探究ADAR1是否通过编辑口腔癌相关microRNAs的成熟进而影响口腔癌细胞迁移、侵袭等生物学特性。第一部分:ADAR1在口腔癌中的表达及意义目的:探讨ADAR1在口腔癌组织及常用口腔癌细胞株中的表达水平,及其与临床病理学特征的关系。方法:收集临床口腔癌组织标本及HN4、HN6、SCC9、CAL27细胞株,提取总RNA和蛋白,进行qRT-PCR和Western Blot检测ADAR1在口腔癌组织及鳞状细胞癌细胞株的表达;分析ADAR1表达水平与TNM分类、临床分期和病理分级的相关性及意义。结果:(1)ADAR1在口腔癌组织中的表达相对于癌旁组织显著增高;(2)ADAR1在淋巴结转移患者中较无淋巴结转移者显著增高;(3)临床分期Ⅲ-Ⅳ患者较Ⅰ-Ⅱ患者ADAR1表达显著增高;(4)体外培养HN4、HN6、SCC9、CAL27细胞株中ADAR1的表达相对于正常口腔黏膜细胞显著增高。结论:ADAR1在口腔癌细胞中高表达,与口腔癌的淋巴结转移相关。第二部分:ADAR1对口腔癌细胞侵袭和迁移的影响目的:探讨ADAR1对细胞侵袭和迁移能力的影响及其与上皮间质转化的相关性。方法:(1)CAL27、HN4细胞敲减或过表达ADAR1后通过划痕实验和Transwell侵袭实验观察细胞的迁移及侵袭能力;(2)CAL27、HN4细胞敲减或过表达 ADAR1 后通过 Western blot 检测 Vimentin、E-cadherin 表达结果:(1)CAL27、HN4细胞敲减ADAR1后,细胞的划痕实验显示实验组si-ADAR1相对于对照组si-NC愈合百分数较小,具有统计学差异;(2)CAL27、HN4细胞过表达ADAR1后,细胞的划痕实验显示实验组LV5-ADAR1相对于对照组LV5-NC愈合百分数较大,具有统计学差异;(3)CAL27、HN4细胞敲减ADAR1后,细胞的Transwell侵袭实验显示实验组si-ADAR1相对于对照组si-NC Transwell小室下室的细胞数较少,具有统计学差异;(4)CAL27、HN4细胞过表达ADAR1后,细胞Transwell侵袭实验显示实验组LV5-ADAR1相对于对照组Transwell小室下室的细胞数较多,具有统计学差异;(5)敲减ADAR1后检测EMT相关蛋白(Vim、E-cad)显示Vim表达降低,E-cad表达升高;(6)过表达ADAR1后检测EMT相关蛋白(Vim、E-cad)显示Vim表达降低,E-cad表达升高;结论:(1)ADAR1促进口腔癌细胞侵袭和迁移能力;(2)ADAR1促进口腔癌细胞上皮间质转化。第三部分:ADAR1调控口腔癌Onco-miRs的成熟过程目的:探讨ADAR1对Onco-miR表达的影响及其可能机制。方法:通过qRT-PCR检测CAL27和HN4细胞敲减和过表达ADAR1后肿瘤相关 miR(miR-21-3p、miR-18a-3p、miR-210-3p、miRNA-155-5p、miR-181a-3p、miR-19a-3p)表达水平,及过表达 ADAR1 后 Onco-miR 相应 pri-miR 和 pre-miR的表达;Western Blot和免疫荧光染色观察ADAR1细胞分布;免疫共沉淀检测ADAR1与DICER的互作。结果:(1)CAL27、HN4敲减ADAR1后检测肿瘤相关miR(miR-21-3p、miRNA-18a-3p、miR-210-3p、miR-155-5p、miR-181a-3p、miR-19a-3p)显示实验组si-ADAR1相对于对照组si-NC肿瘤相关miR表达降低;(2)CAL27、HN4细胞过表达ADAR1后检测肿瘤相关miR显示实验组LV5-ADAR1相对于对照组LV5-NC肿瘤相关microRNA表达增高;(3)CAL27、HN4细胞过表达ADAR1后检测Onco-miR相应pre-miR,显示实验组LV5-ADAR1相对于对照组LV5-NC pre-miR表达具有降低趋势;(4)CAL27、HN4细胞过表达ADAR1后检测Onco-miR相应的pri-miR,显示实验组LV5-ADAR1相对于对照组LV5-NCpri-miR表达具有降低趋势;(5)ADAR1主要分布于细胞浆;(6)ADAR1与DICER互作。结论:ADAR1与DICER互作促进Onco-miR表达。