石榴多酚类物质的分离鉴定和抗氧化活性研究

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植物多酚是植物体内的次级代谢产物,现代科学研究证实多酚类物质具有多种生物学活性,对于人类的健康具有积极的作用。石榴(Punica grantum L.)为石榴科石榴属植物,在我国已有2000多年的栽培历史。我国石榴资源丰富,目前栽植面积达64668hm2,居世界第一位,产量达38万多吨。石榴不仅营养丰富,而且富含多种生理活性物质,具有多种防病治病的功效,是历代药典中的重要中药,其中多酚类是石榴中含量最为丰富的一类活性物质。在当今人们越来越重视天然植物活性成分对疾病的预防和治疗作用的大背景下,对石榴多酚类物质进行研究,不仅可深化人们对石榴功能价值的认识,也可为石榴的合理开发利用奠定基础。本研究以石榴果实为研究对象,以石榴汁以及石榴加工副产物果皮、籽粒废渣为原料,对其各部位(皮、汁、渣)多酚进行提取和分离,寻找适用的分离方法,对其多酚组成和含量进行分析,通过体外、体内实验考察和比较石榴多酚抗氧化活性,对石榴果实多酚进行了比较全面、系统的研究。研究结果如下:(1)确定了石榴皮多酚(PPPs)乙醇提取最优工艺,即:乙醇浓度60%、浸提温度60℃、料液比1∶20、浸提时间2h,提取两次,多酚得率为23.39%。超声波辅助提取的最佳处理时间为30min,提取两次,多酚得率为23.68%。(2)确定了石榴渣多酚(PRPs)乙醇提取最优工艺,即:乙醇浓度50%、浸提温度60℃、料液比1∶20、浸提时间4h,提取两次,多酚得率为0.69%。超声波辅助提取的最佳处理时间为30min,提取两次,多酚得率为0.79%。原料干燥方式采用烘箱干燥。(3)筛选出一种简便易行的石榴多酚纯化富集方法(一种有机溶剂萃取法),该方法对石榴皮、石榴汁和石榴渣粗提物的纯化倍数分别为2.75、14.08和7.84倍,纯化产品多酚含量分别为79.83%、10.56%和23.76%。(4)测定了临潼净皮甜石榴皮、汁、渣中的酚类成分及含量,结果表明:石榴皮中多酚类物质含量最为丰富,总酚含量达23.83%,鉴定出9种酚类成分,其中主要成分为安石榴苷,其含量为116.23mg/g,占总酚含量的48.76%,其次为没食子酸、表儿茶素、绿原酸等,含量均很低。石榴汁中的多酚成分组成最为丰富,总酚含量为0.11%,鉴定出11种酚类成分,含量较高的有安石榴苷、表儿茶素、绿原酸、儿茶素和咖啡酸等。石榴渣中总酚含量为0.83%,鉴定出10种酚类成分,含量较高的有安石榴苷、表儿茶素、芦丁、没食子酸、儿茶素等。(5)测定和比较了三种来源的石榴多酚体外抗氧化和清除自由基活性,结果表明,石榴皮、汁、渣中提取的多酚物质均具有较强的体外抗氧化和清除自由基活性。在总酚质量浓度相同的情况下,还原能力强弱为:石榴渣多酚(PRPs)(EC50 53.75mg/L)>石榴皮多酚(PPPs)(EC50 54.70mg/L)>石榴汁多酚(PJPs)(EC50 59.45mg/L);对超氧阴离子自由基的清除能力顺序为:PRPs(IC50 14.66mg/L)>PJPs(IC50 18.88mg/L)>PPPs(IC50 22.41mg/L);清除羟自由基能力大小为:PJPs(IC50 308.70mg/L)>PRPs(IC50 331.50mg/L)>PPPs(IC50350.31mg/L);对DPPH自由基的清除能力大小为:PJPs(IC50 3.89mg/L)>PRPs(IC50 4.74mg/L)>PPPs(IC50 4.74mg/L);对脂质过氧化的抑制能力强弱为:PRPs(IC50 12.29 mg/L)>PJPs(IC50 17.66 mg/L)>PPPs(IC5024.37 mg/L)。总体来说,PRPs和PJPs的抗氧化活性要略强于PPPs。(6)通过动物试验测定了石榴皮多酚的体内抗氧化活性,结果表明,石榴皮多酚提取物能提高小鼠血液、肝脏及脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和小鼠血液、肝脏中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;降低小鼠血液、肝脏及脑组织中丙二醛(MDA)含量;而对小鼠的体重和脏器指数等一般生理状况不会产生显著影响。表明石榴皮多酚具有体内抗氧化作用,且其作用大小与剂量呈正相关。
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