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鸭疫里默氏杆菌(Riemrella anatipestifer,RA)病是一种接触性细菌性传染病。目前可以确定的RA血清型有21种,但血清型之间的交叉免疫保护性极差。由于RA中的ompA基因序列的保守性非常高,许多研究学者对ompA基因产生了兴趣,尤其是对其免疫学功能的研究,希望通过对RA不同的血清型中ompA基因研究来解决RA不同血清型的缺乏交叉免疫保护这一难题。另外已经有5株RA的全基因组序列已提交到GenBank中,分析结果表明编码的蛋白预测约有2000个,但对于RA中的蛋白生物学功能尚不清楚。OmpA蛋白是RA中的主要外膜蛋白,具有免疫原性,ompA基因具有保守性,在不同RA血清型中有特别高的同源性。研究ompA基因的生物学特性为OmpA蛋白制成新型亚单位疫苗及为RA病预防治疗奠定基础。此外,OmpA蛋白是外膜蛋白主要成份,在细菌物质的运输、细菌信号的传递、细菌结构的保持等方面均起重要作用。为了了解鸭疫里默氏杆菌ompA基因缺失对RA生物学特征的影响,本研究通过同源重组的方法用自杀质粒构建了ompA基因缺失株CH3ΔompA株。用pDS132自杀质粒连接用PCR方法扩增的ompA基因左右两侧的同源臂和壮观霉素抗性基因表达盒,获得pDS132-ompA-LSR的重组自杀质粒。然后将此重组质粒通过接合转导的方法转入到CH3亲本株中,用含Kan和Spc筛选TSA培养基,筛选可能的基因缺失株,并用PCR和Western blot进行鉴定,获得基因缺失株CH3ΔompA。然后将完整的ompA基因克隆到pRES0穿梭载体上,用结合传导的方法回复到CH3ΔompA中,从而得得到缺失株的互补株CH3ΔompA(pRES0-ompA)。本研究采用纸片法对CH3、CH3ΔompA和CH3ΔompA(p RES0-ompA)菌株进行药敏试验,分析CH3、CH3ΔompA和CH3ΔompA(pRES0-ompA)的耐药性差别。结果表明,野生株CH3与CH3ΔompA相比,野生株CH3对氯霉素、红霉素和四环素等抗生素的耐药性比缺失株CH3ΔompA要强。互补株CH3ΔompA(pRES0-ompA)对四环素、盐酸多西环素、红霉素和氯霉素的耐药性介于缺失株CH3ΔompA与CH3野生株之间,其对青霉素类抗生素的耐药性增强可能是由于在大肠杆菌-RA中穿梭表达质粒pRES0上携带了氨苄抗性bla基因所引起。野生株CH3、缺失株CH3ΔompA及其互补株CH3ΔompA(pRES0-ompA)对氨基苷类抗生素和甲氧苄啶均为耐受。试验结果表明,CH3ΔompA基因缺失株与野生株CH3相比繁殖速度减慢,对NaCl(盐离子浓度)的耐受能力降低,对部分抗生素的敏感性增加,而对去污剂SDS、EDTA和酸碱(pH)耐受性没有明显的影响。CH3ΔompA基因缺失株比CH3野生株形成生物被膜的能力显著增强。