啤酒花多糖的纯化及抗氧化活性研究

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植物多糖具有很多的药理活性,与维持生命机能密切相关,且细胞毒性小,近年来已引起广泛关注。啤酒花有上千年的应用历史,已探明其中的苦味树脂、多酚、黄酮类物质具有多种药理活性和功效,但对啤酒花多糖的活性研究尚属空白。啤酒花也是新疆地区的重要经济作物,年产量大约在6000吨以上,在啤酒花的加工过程中,仅利用了其中的脂溶性苦味成分和香味成分,其余基本作为废弃物处理,啤酒花多糖类成分也基本上保留在废弃物中。论文以液态CO2萃取啤酒花浸膏的萃余物为原料,在研究啤酒花中多糖类物质组成和分布的基础上,综合评价了初步分离后的啤酒花多糖各组分的清除自由基能力和抗氧化活性;接着对啤酒花多糖粗提物进行脱蛋白、脱色处理,并对啤酒花粗多糖进行了进一步的纯化分离,确定了分离纯化后的一个啤酒花多糖组分的基本构型、一级结构信息。采用传统热水浸提的方法提取啤酒花中的糖类化合物,并对分步和分级醇沉得到的啤酒花粗多糖的提取率和含量进行了分析和研究,基本确定了啤酒花中多糖的含量分布。通过正交试验和单因素试验确定了啤酒花多糖的热水微波辅助萃取的最佳工艺条件为提取时间2h、料液比1:10、提取温度90℃、作用时间12min;此条件下多糖提取率达到2.76%。将得到的啤酒花粗多糖,以蛋白脱除率和多糖保留率为指标,确定了采用菠萝蛋白酶-三氯乙酸-正丁醇结合的方法脱蛋白效果最好,而木瓜蛋白酶-盐酸-正丁醇结合的方法在有效脱除蛋白质的同时,多糖损失最少。对得到的啤酒花粗多糖,通过水提、醇沉、脱蛋白、过氧化氢脱色、再次醇沉得到的初步提纯的啤酒花多糖样品(HPC),再经过DEAE-纤维素柱、透析、分步醇沉,得到纯化的啤酒花多糖样品(HPC1a),对HPC和HPC1a的纯度、含量进行了分析,并运用了红外光谱、紫外光谱、薄层层析法和PMP柱前衍生高效液相色谱法等仪器分析方法对纯度较高的啤酒花多糖样品进行结构的初步解析。结果表明,得到的啤酒花多糖可能是一种β-型吡喃糖,含有糖醛酸,不含多酚类、蛋白、核酸和还原糖等成分;其中的单糖组成主要是D-阿拉伯糖,D-半乳糖,L-(-)-岩藻糖,L-鼠李糖,D-甘露糖,D-半乳糖醛酸和D-葡萄糖醛酸组成,摩尔比为:10.77:3.91:2.19:0.33:0.20:0.31:0.57。应用DPPH自由基清除能力实验、羟基自由基的清除能力实验、亚硝酸清除能力实验、还原力测定和β-胡萝卜素-亚油酸乳化法等五种体外评价体系,对分级和分步醇沉得到的啤酒花粗多糖体外抗氧化活性进行了研究,结果表明啤酒花多糖提取物在不同的抗氧化体系中均表现出一定的抗氧化活性。其中,啤酒花多糖在β-胡萝卜素-亚油酸乳化液评价体系中的总抗氧化活性和清除羟基自由基、亚硝基的能力相对较强,而总还原能力和清除DPPH自由基的能力相对较弱;且随着分子量的减小,其抗氧化能力呈明显的增加趋势。
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