论文部分内容阅读
斯氏副柔线虫病由斯氏副柔线虫(Parabronema skrjabini)寄生于反刍兽真胃引起。斯氏副柔线虫的最适宜宿主为骆驼,大量虫体寄生可导致患驼真胃发生炎症、出血、溃疡,是造成骆驼拉稀病和营养不良的重要原因之一,严重者造成骆驼死亡,对养驼业危害最为严重,长期以来,给农牧民带来了巨大的经济损失。目前,对该寄生虫生活史及传播媒介尚不明确,特别是在我国其传播媒介究竟是什么?一直不清楚。另外,关于该病的生前诊断方法,国内外研究资料基本没有。因此对骆驼斯氏副柔线虫病的诊断和防治工作难以做到有的放矢。本论文主要从斯氏副柔线虫病传播媒介这一关键点入手,开展了这方面的研究工作。首先调查了内蒙古4个地区(阿拉善盟阿拉善左旗、乌兰察布市四子王旗、鄂尔多斯市杭锦旗、巴彦淖尔市乌拉特后旗)骆驼斯氏副柔线虫病的发病情况,先后共剖解了不同年龄的双峰驼143峰,发现内蒙古地区双峰驼斯氏副柔线虫病感染率为81.8%,最高感染强度为1315条/峰,骆驼真胃内斯氏副柔线虫雌雄虫比例在3.9∶1~1.2∶1之间;老年驼相对于中年驼和青年驼感染率和发病率均较高,主要病变是真胃粘膜溃疡、脱落、淤血、出血,真胃组织腺泡上皮细胞浓缩、变性,淋巴细胞异常增生。分析研究了内蒙古地区骆驼主产区(阿拉善盟阿拉善左旗、乌兰察布市四子王旗和巴彦淖尔市乌拉特后旗)双峰驼生活环境中可能性传播媒介——蝇类的分布和存在情况,共捕获7000多只蝇,鉴定出25个蝇种,它们分别隶属于7科17个属,另有2个科(扁蝇科Coelopidae,锯翅蝇科Trixoscelidae)未鉴定到属种;上述蝇种中内蒙古地区新纪录蝇种有12种,包括:亚洲家蝇(Musca asiatica)、亮家蝇(M. cassara)、带纹家蝇(M. confiscata)、黄腹家蝇(M. ventrosa)、西方角蝇(Haematobia irritans)、黄粉寄蝇(Tachina flavosquama)、亚洲毛蚤蝇(Chaetopleurophora asiatica)、东亚异蚤蝇(Megaselia spiracularis)、海滨溜蝇(Lispe litorea)、中华莫蝇(Morellia sinensis)、黑基地种蝇(Decia nigribasis)和小纹鬃粪蝇(Norellia striolata)。对最可疑的传播媒介——3种吸血蝇(西方角蝇Haematobia irritans,截脉角蝇H. titillans和厩螫蝇Stomoxys calcitrans)在形态学分类鉴定的基础上,对其mtDNA部分COI基因序列进行了研究,其中首次测定了截脉角蝇COI基因序列。并在此基础上结合rDNA ITS基因对2种角蝇进行了分子分类验证,结果证明对三种吸血蝇的形态学种属鉴定准确无误。为了对斯氏副柔线虫病可疑传播媒介进行筛选,首先对捕获的25种及未鉴定到属种的两个科的蝇类进行了详细的生物学剖检。结果显示:在两种吸血蝇——西方角蝇和截脉角蝇体内(胸腹部,以腹部居多)均发现了疑似斯氏副柔线虫幼虫,其中雄蝇的感染率为43.8%~48%,雌蝇的感染率为35.7%~46.2%,感染强度为1~22条。所获疑似斯氏副柔线虫幼虫多数呈盘旋状,长短不一,可分清首尾,头部口孔周围有两个突起,消化道比较明显,基本可以分清食道肌质部和腺质部,虫体尾部肛门清晰可见。此外,还在亚洲毛蚤蝇(Chaetopleurophora asiatica)体内也检获到了一种未知种线虫体,但其形态与疑似斯氏副柔线虫幼虫差异较大,明显是另一种线虫。设计了斯氏副柔线虫特异性引物(ST1、ST2),并利用骆驼和其它反刍家畜7种胃肠道常见线虫及吸血蝇对其特异性进行了验证,然后对西方角蝇和截脉角蝇体内剖检得到的幼虫rDNA ITS基因进行了扩增、测序,结果表明所测西方角蝇和截脉角蝇体内线虫幼虫序列与GenBank中已登录的斯氏副柔线虫ITS序列同源性分别为99.2%和99.3%,证实了两种角蝇体内发现的线虫幼虫确为斯氏副柔线虫幼虫,因此确定西方角蝇和截脉角蝇为我国骆驼斯氏副柔线虫传播媒介。此外,还利用常规粪便虫卵检查法(直接涂片法、漂浮法、沉淀法)对模拟阳性驼粪中的斯氏副柔线虫虫卵进行了实验室检测,证实常规寄生虫粪便检查方法难以检出骆驼粪便中的斯氏副柔线虫虫卵;随后利用PCR技术对斯氏副柔线虫虫卵检测进行了探讨,发现常规PCR技术和巢式PCR技术检出骆驼斯氏副柔线虫虫卵的最低敏感性分别为15枚和5枚,提出了斯氏副柔线虫虫卵可直接用于PCR反应体系进行目的片段扩增的可能性,这为建立骆驼斯氏副柔线虫病分子生物学生前诊断方法提供了前期研究工作基础。