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本论文以鼠掌老鹳草为研究材料,建立了高效、快速、简便、准确的鼠掌老鹳草多酚类化合物的分析方法;考察了鼠掌老鹳草全草、根、茎和叶片的生物量,揭示了不同部位中柯里拉京、老鹳草素和总酚含量的季节变化规律,并通过抗氧化活性指导,确定了鼠掌老鹳草的最佳采收部位、采收时间;建立了微波酶/盐酸水解辅助提取方法并通过单因素、CCD试验和准一级方程优化了工艺条件,明确了微波酶/盐酸水解辅助提取方法的粗提物抗氧化活性,同时分析了微波酶/盐酸水解辅助提取方法的破壁作用过程;通过FRAP、DPPH、NO、β3-胡萝卜素-亚油酸漂白、一氧化氮(NO)和还原力等抗氧化试验,确定了不同分层粗提物的抗氧化活性,明确了柯里拉京和老鹳草素单体的抗氧化活性。1.建立了鼠掌老鹳草中多酚类成分HPLC检测方法:建立了 HPLC-UV同时分离检测鼠掌老鹳草粗提物中的2种多酚类成分的条件:色谱条件:HiQ SiL C18V反相柱(250 mm × 4.6 mm I.D.),流动相为12%乙腈-0.1%甲酸水溶液,流速1 mL/min,进样量10 μL,柱温30℃,波长220nm。2.鼠掌老鹳草中多酚类抗氧化活性成分的季节变化研究,结果表明:(1)鼠掌老鹳草的全草、叶片和茎干重的季节变化趋势相似,都存在速生生长期(五月份到六月份),缓慢生长期(从六月份到七月份)和枯萎期(从八月份到九月份)。而根则存在快速生长期(从五月到七月)和缓慢生长期(七月份到九月份)。(2)确定了鼠掌老鹳草多酚和黄酮物质含量的季节变化规律,即:柯里拉京、老鹳草素和总酚含量在营养生长期增加较快,生殖生长期和枯萎期含量迅速下降,而总黄酮含量则在生长期不断下降,在生殖生长期和枯萎期含量有所增高。(3)通过总体抗氧化活性评价试验确定鼠掌老鹳草的最佳采收时间是7月份,最佳采收部位是全草,其 FRAP 值为 1 1.24±0.28 mmol Fe(Ⅱ)/g extracts。(4)鼠掌老鹳草中的总酚、柯里拉京和老鹳草素具有较高相关性,而且DPPH、FRAP、ABTS抗氧化活性检测方法之间也具有较好的相关性。(5)通过PCA分析表明鼠掌老鹳草中的柯里拉京、老鹳草素和总酚的含量可以表征其抗氧化活性。3.优化微波酶辅助提取鼠掌老鹳草中的柯里拉京和老鹳草素并评价其抗氧化活性研究表明:(1)微波和酶可以联合使用并提高鼠掌老鹳草中柯里拉京和老鹳草的提取率,而且本提取方法不采用任何有机溶剂。(2)微波微波酶辅助提取法的最佳条件是辐射功率500 W、液固比40 mL/g、温度33℃、pH 5.2、酶的用量3600U/g、提取时间9min。其粗提取中的柯里拉京和老鹳草素的提取产量分别为6.79和19.82 mg/g,分别比对照试验提高了64.01%和72.95%。(3)微波和酶联用辅助提取方法的传质动力学过程包括“冲洗阶段”、快速阶段和缓慢阶段。(4)采用优化的微波酶辅助提取法,其粗提物的抗氧化活性显著提高,其FRAP抗氧化活性为2.61 mmol FeSO4/g DW,DPPH清除自由基的IC50是0.118mg/mL。(5)微波酶辅助提取法具有较高提取效率并且具有环境友好的特点,可以作为天然产物提取的一种替代方法。4.以抗氧化活性指导的微波酸水解辅助提取鼠掌老鹳草中的酚类化合物的研究表明:(1)微波酸水解辅助提取方法不仅能够提高鼠掌老鹳草中柯里拉京、老鹳草素和总酚含量,而且能够提高其抗氧化活性,其中微波盐酸的DPPH、FRAP和ABTS抗氧化值分别为 0.0856 mg/ml(IC50)、13.0043和4.8722 mmol TE/g。(2)微波盐酸水解辅助提取法的最佳条件是辐射功率500W、液固比25 mL/g、温度33℃、乙醇浓度22%、HCl浓度0.03 mol/L、提取时间8 min。其粗提取中的柯里拉京、老鹳草素提取率和总酚含量分别比对照高出28.60%、53.80%和35.65%。(3)微波盐酸辅助提取方法传质动力学过程中,柯里拉京的传质速度好高于老鹳草素。(4)SEM电镜观测试验表明微波盐酸提取方法对细胞壁的破坏程度较大。(5)微波酸水解辅助提取法具有提取效率高、用时短等特点,因此可以作为提取多酚类物质的又一种替代方法。5.鼠掌老鹳草粗提物不同分层及主要酚类化合物抗氧化活性评价研究表明:(1)总体抗氧化能力试验表明,鼠掌老鹳草乙醇提取物中的乙酸乙酯和正丁醇分层具有较好的抗氧化能力,它们的总体抗氧化能力分别是17.32和16.71 mmol Fe(Ⅱ)/g extracts)。(2)对鼠掌老鹳草粗提物的不同分层进行柯里拉京、老鹳草素和总酚含量检测,结果表明乙酸乙酯层和正丁醇组分中柯里拉京、老鹳草素和总酚的含量较高。它们的含量分别为 67.71±0.72 mg/g、211.91±3.42 mg/g、450.21 mg GAE/g extracts 和 50.32 mg/g、137.36 mg/g、372.15mg GAE/g extracts。(3)对鼠掌老鹳草粗提物的不同分层进行抗氧化活性综合评价,结果表明乙酸乙酯在DPPH、NBT、β-胡萝卜素-亚油酸漂白、还原力等试验中均表现出较好的抗氧化活性,其 IC50 分别为 0.03822、0.063、0.0061、0.047 和 0.00606 mg/mL。(4)不同分层的柯里拉京、老鹳草素和总酚含量与抗氧化活性相关关系分析表明,鼠掌老鹳草中发挥抗氧化作用的主要物质可能是柯里拉京和老鹳草素。(5)柯里拉京和老鹳草素抗氧化活性实验表明,老鹳草素在清除超氧自由基、过氧自由基和羟自由基等方面都要好于柯里拉京,其DPPH、NO、NBT、β-胡萝卜素-亚油酸漂白、还原能力等抗氧化活性的IC50分别为0.032、0.0337、0.0023、0.0387和0.0034 mg/mL。