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背景和目的:胃癌是全球四大常见恶性肿瘤之一,给人类的健康带来了巨大的威胁。我国胃癌发生率和死亡率高居各类肿瘤的第二位。胃癌的发病机制非常复杂,各种环境因素及多种其他途径都可能成为诱因。手术是治疗胃癌最有效的方法,早期诊断可提高胃癌患者的生存率。由于胃癌的治疗方案的局限性,以及胃癌发病机制复杂,并且诱因较多。因此,进一步阐明并且揭示胃癌的发生机制非常必要且迫切。长链非编码RNA(LncRNAs)作为横跨整个哺乳动物基因组进行表达的一种非编码RNA的亚类,近来被报道可以通过竞争性结合miRNA的机制在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。LINC00319被报道通过抑制miR-32促进肺癌细胞的增殖和侵袭。我们前期通过生物信息学分析及qPCR实验表明在胃癌基因表达芯片、胃癌组织和胃癌细胞中LINC00319高表达,miR-335-5p下调。进一步的生物信息学分析预测腺苷酸环化酶3(ADCY3)是miR-335-5p的靶基因,我们推测LINC00319在胃癌的发生发展中起着重要作用。因此,本论文将研究LINC00319在胃癌生长和转移中的作用及其调控机制,验证LINC00319是否吸附靶向miR-335-5p来调控ADCY3的表达,参与到胃癌生长和转移的过程。本论文将为胃癌的预防以及治疗提供新的理论基础和新的方向。材料和方法:1.胃癌LINC00319的表达模式(1)从基因表达综合数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)获得胃癌相关基因表达芯片数据,筛选与胃癌相关的差异表达基因和长链非编码RNA,并通过生物信息学对这些差异表达基因和长链非编码RNA靶向的miRNA进行预测。(2)通过RT-qPCR检测11对胃癌组织及其配对的癌旁组织中的LINC00319和miR-335-5p的表达。(3)选取胃癌细胞系(BGC-823、MGC-803和SGC-7901)和作为对照的正常胃粘膜上皮细胞系(GES-1和RGM-1),进行RT-qPCR检测LINC00319和miR-335-5p的表达。(4)我们通过荧光原位杂交技术检测LINC00319在细胞内的定位。2.LINC00319的相互作用模式(1)通过双荧光素酶报告基因分析实验和RNA捕获实验检测LINC00319和miR-335-5p,以及miR-335-5p可与ADCY3的相互作用。(2)敲低或者过表达LINC00319后通过RT-qPCR检测LINC00319和ADCY3的RNA水平。3.LINC00319在胃癌生长和转移中的作用(1)我们在胃癌细胞中过表达LINC00319后,通过RT-PCR和Western blot分析检测CDK4、MTA1和GAS1的mRNA和蛋白表达水平。接下来,我们分别通过EDU分析、流式细胞术和划痕试验检测细胞增殖、凋亡和迁移。(2)我们把过表达LINC00319的胃癌细胞系以及未转染LINC00319的空白对照细胞系,移植到裸鼠中,检测肿瘤重量、肿瘤体积、肝脏转移率、腹水率、腹水体积和微血管密度。4.LINC00319调控胃癌生长和转移的机制(1)我们通过在胃癌细胞中敲低miR-335-5p以及过表达ADCY3的表达,检测细胞的增殖和迁移能力。通过RT-qPCR和Western blot来检测ADCY3、CDK4、MTA1和GAS1的mRNA和蛋白表达水平。进一步通过EDU实验、流式细胞仪和划痕实验来检测细胞的增殖、迁移和凋亡。(2)我们通过在胃癌细胞中敲低miR-335-5p以及过表达ADCY3的表达,移植到裸鼠中,检测肿瘤重量、肿瘤体积、肝脏转移率、腹水率、腹水体积和微血管密度。结果:1.胃癌组织和细胞中LINC00319的表达模式(1)LINC00319和ADCY3在胃癌基因芯片中高表达。对LINC00319和ADCY3靶向的miRNA的预测结果表明,miR-335-5p是LINC00319和ADCY3共同靶向的miRNA。(2)与胃癌癌旁组织相比,胃癌组织中LINC00319高表达,miR-335-5p低表达。(3)与正常胃上皮细胞系相比,胃癌细胞系中LINC00319高表达,miR-335-5p低表达。(4)LINC00319在细胞质中表达。2.LINC00319的相互作用模式(1)LINC00319与miR-335-5p相互作用,miR-335-5p与ADCY3相互作用。(2)LINC00319过表达组中LINC00319和ADCY表达升高,而LINC00319敲低组呈现相反的趋势。3.LINC00319在胃癌生长和转移中的作用(1)与空白组相比,LINC00319过表达组CDK4、MTA1的mRNA和蛋白表达水平升高,GAS1的mRNA和蛋白表达水平降低。LINC00319过表达组细胞增殖和迁移能力增强,细胞凋亡率降低。(2)与空白组比较,过表达LINC00319组的肿瘤重量、肿瘤体积、肝脏转移率、腹水率、腹水体积、MVD显著增加。4.LINC00319调控胃癌生长和转移的机制(1)与空白对照组相比,miR-335-5p抑制组中miR-335-5p表达降低,miR-335-5p模拟组+ADCY3过表达组miR-335-5p表达上调;与空白组比较,miR-335-5p抑制剂组和ADCY3过表达组CDK4、MTA1的mRNA和蛋白表达水平升高,GAS1的mRNA和蛋白表达水平降低。miR-335-5p抑制剂组和ADCY3过表达组细胞增殖、迁移率增加,凋亡细胞百分率降低。(2)与空白对照组相比,miR-335-5p抑制组和ADCY3过表达组的肿瘤重量、肿瘤体积、肝脏转移率、腹水率、腹水体积、MVD显著增加。结论:1.胃癌中LINC00319和ADCY3高表达,miR-335-5p低表达。生物信息学分析预测LINC00319可通过与miR-335-5p竞争性结合参与ADCY3的调控。2.LINC00319过表达促进胃癌细胞增殖,迁移,却抑制细胞凋亡,并且促进裸鼠肿瘤生长及迁移。3.LINC00319通过吸附miR-335-5p促进靶基因ADCY3的表达。4.miR-335-5p通过抑制ADCY3的表达抑制胃癌细胞增殖和迁移,并且抑制裸鼠中肿瘤的生长和迁移。