脊椎动物的适应性免疫应答主要由B淋巴细胞和T淋巴细胞介导。T细胞通过释放细胞毒性因子直接杀死被感染细胞或异常细胞,或通过分泌各种细胞因子协同其他免疫细胞执行其功能。硬骨鱼是最早具有适应性免疫系统的脊椎动物,尽管对于哺乳动物T细胞信号转导机制的研究取得了显著进展,但对于硬骨鱼T细胞的活化过程仍有待研究。CD3分子在T细胞激活和T细胞信号转导中发挥重要作用,本文对大黄鱼CD3分子的研究结果将为研究硬骨鱼T细胞的活化奠定基础。本论文从大黄鱼中克隆得到了CD3γ/δA、CD3γ/δB、CD3ε和CD3ζ的开放阅读框(Open reading frame,ORF)序列,它们的ORF分别长522、573、555和456 bp,分别编码一个含173、190、184和151个氨基酸残基的多肽。LcCD3γ/δA、LcCD3γ/δB和LcCD3ε的胞外段均含有2个保守的半胱氨酸和一个CXXCXE结构域;胞质区含有一个可以传递信号的ITAM(immunoreceptor tyrosine-based activation motif)基序;LcCD3ε跨膜区含有一个保守的天冬氨酸,而LcCD3γ/δA和LcCD3γ/δB的跨膜区均含有一个天冬酰胺。LcCD3ζ与其他CD3亚基有所不同,其胞外段只含有8个氨基酸残基,胞内段含有3个ITAM基序。多序列比对结果表明,LcCD3ε、LcCD3γ/δ与鳜鱼CD3ε、CD3γ/δ一致性最高,LcCD3ζ与红笛鲷CD3ζ的一致性最高。LcCD3各亚基在健康大黄鱼各个组织及免疫相关细胞中均呈组成型表达,但转录水平有所不同。LcCD3γ/δA和LcCD3γ/δB mRNA在肠、血液、鳃和脾脏中高表达,LcCD3ε和LcCD3ζmRNA在鳃和脾脏中高表达,LcCD3各个亚基mRNA表达水平均在头肾淋巴细胞中最高。用溶藻弧菌(Vibrio.alginolyticus)刺激后,大黄鱼脾脏和头肾中LcCD3γ/δA、LcCD3γ/δB、LcCD3ε和LcCD3ζmRNA表达水平上调,并在24 h达到最高,说明其可能参加了宿主抗细菌的免疫应答。用T细胞有丝分裂原PHA或Con-A刺激后,头肾淋巴细胞中LcCD3各个亚基mRNA表达水平显著上调,并在8 h达到最高,说明LcCD3可能在T细胞活化中发挥重要作用。此外,我们在大肠杆菌中重组表达了LcCD3ε,并利用此重组蛋白制备了抗LcCD3ε多克隆抗体。DLD(Dihydrolipoyl dehydrogenase)刺激后,脾脏中LcCD3ε蛋白水平及LcCD3各个亚基和细胞因子Lc IL-2、Lc IFN-γmRNA表达水平均有所上调。综上所述,我们克隆并鉴定了大黄鱼CD3γ/δA、CD3γ/δB、CD3ε和CD3ζ,研究发现他们可能参与宿主抗细菌的免疫应答,并且在T细胞活化中发挥作用。