IL-Iβ诱导下人牙龈成纤维细胞表达EGFRR的研究

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目的:①建立起人牙龈成纤维细胞的体外模型,为进一步的实验和研究提供基础。②观察牙龈成纤维细胞在不同浓度IL-ip干预人后EGFR的表达状况,进一步明确EGFR在牙周病发生发展过程中提供理论依据。  方法:①首先对人的牙龈成纤维细胞依次分离和培养利用的是原代组织块方法,其次观察人的牙龈成纤维细胞的生物学特性,绘制其生长曲线并观察其增值的规律,最后确定来源,鉴定对其进行抗角蛋白和抗波形丝蛋白抗体是利用免疫组织化学方法,从而成功建立起人的牙龈成纤维细胞体外的模型。②利用培养成功的5~8代人的牙龈成纤维细胞,后行爬片的制取,IL-ip浓度分别为Ong/ml、0.Ing/ml、0.5ng/ml、Ing/ml、Sng/ml、lOng/ml干预人的牙龈成纤维细胞,在24h后采用免疫组织化学方法检测EGFR在各组干预浓度细胞中的表达,并观察人的牙龈成纤维细胞在形态学上的变化,最后数据分析和图像分析利用医学图像分析系统,,进行统计分析人牙龈成纤维细胞经IL-ip干预后在细胞中的表达EGFR,是采用单因素方差分析法。  结果:①建立起人牙龈成纤维细胞的体外模型,人牙龈成纤维细胞利用原代组织块培养法,细胞呈现长梭形或星形在倒置显微镜下观察,细胞抗角蛋白抗体阴性在光镜下观察免疫组织化学染色,而抗波形丝蛋白抗体阳性,从而证明有成纤维样细胞特性并且源自中胚层的;传代培养,5~8代细胞活力良好,形态规则且增殖速度较快,但8代后细胞增值速度减慢且出现衰老凋亡迹象。②人牙龈成纤维细胞经IL-1β24h干预后用免疫组织化学方法检测EGFR在细胞中的在蛋白水平上表达结果表明:对照组中EGFR在人的牙龈成纤维细胞中呈阴性表达,人的牙龈成纤维细胞经IL-ip干预后EGFR在细胞中呈阳性表达。人牙龈成纤维细胞经IL-ip干预后EGFR在细胞中的表达特征表明,在O.lng/ml-lOng/ml浓度内EGFR的表达出递增的趋势是随着IL-ip干预浓度的升高,细胞在IL-ip干预后,在没有明显变化的细胞形态是由于在低浓度,在干预升高浓度时,细胞核变大星形细胞所占比例增高,但在0.Ing/ml-lOng/ml浓度内未见细胞有衰老和凋亡现象。  结论:①建立起人牙龈成纤维细胞的体外模型是利用了原代组织块法,此法容易操作且成活率高,生物学特性在人牙龈成纤维细胞中得到了良好地反映;适于进行实验研究的是5~8代细胞,是由于形态和功能处于稳定期,但8代后细胞成稳定性下降,进行实验研究的不适合是由于其成活率下降。②结果表明:人的牙龈成纤维细胞在IL-ip干预后的表达EGFR,发生和发展的牙周炎症中表明了有EGFR的参与,而且调控在牙周炎的进程中重要的作用。
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