种植体周围炎小鼠模型的建立及NLRP3在模型中的表达研究附20例临床病例汇报

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目的:构建小鼠种植体周围炎模型,研究NLRP3在小鼠种植体周围炎牙龈组织中的表达,阐明其对种植体周围炎发病的作用。方法:研究使用36只4周龄C57BL/6J雄性小鼠,拔除右侧上下第一臼齿,在上颌第一臼齿的远中腭根拔牙窝中即刻植入纯钛定制式种植体,愈合4周获得骨结合。然后随机分为空白组、对照组和模型组,每组12只。空白组小鼠在结扎第0天(即结扎处理前)处死,获取标本;模型组为结扎处置2周后组,将5-0丝线牢固地放置在模型组种植体的龈下颈部,结扎处理2周后处死动物,获取标本;对照组未做结扎处理,观察2周后处死动物,获取标本。每组6只用于Micro-CT和基因表达分析,每组的另外6只小鼠用于组织形态学分析。通过形态学观察评估牙龈组织的炎症征象,使用Micro-CT扫描小鼠骨组织,用以评估种植体周围的骨高度和骨密度差异,通过HE染色、TRAP染色方法对各组标本进行组织学分析,使用RT-PCR方法检测各组牙龈组织中NLRP3、IL-1β的mRNA表达水平。结果:形态学观察显示,模型组种植体周围牙龈组织可查见明显的发红、水肿、质地变软和渗出,而空白组和对照组无肉眼可见的炎症征象。Micro-CT扫描并分析后得到每组小鼠种植体周围骨高度数据如下:876.6±50.03μm(空白组近中侧)、834.3±37.56μm(对照组近中侧)、576.2±55.81μm(模型组近中侧)、906.2±87.58μm(空白组远中侧)、864.5±58.70μm(对照组远中侧)、555.8±26.61μm(模型组远中侧)、1019±86.59μm(空白组颊侧)、954.4±42.86μm(对照组颊侧)、584.3±75.00μm(模型组颊侧)、819.9±42.17μm(空白组腭侧)、792.8±78.99μm(对照组腭侧)、556.8±60.59μm(模型组腭侧)。与对照组相比,模型组的近中侧、远中侧、颊侧、腭侧骨高度均显著降低(P<0.05),而空白组的近中侧、远中侧、颊侧、腭侧骨高度无统计学差异(P>0.05)。对于种植体周围感兴趣区域(VOI)内剩余骨密度值,模型组[(964.6±6.586)㎎/HA ccm]与对照组[(1034±44.05)㎎/HA ccm]相比有统计学差异(P<0.05),对照组剩余骨密度值[(1034±44.05)㎎/HA ccm]与空白组[(993.5±10.02)㎎/HA ccm]相比,无统计学差异(P>0.05)。组织学切片显示种植体颊部和腭部骨水平明显下降,模型组感兴趣区域(ROI)中TRAP阳性细胞的数量(26.67±10.02)与对照组(5.00±2.00)相比有统计学差异(P<0.05),而空白组(3.33±1.53)与对照组相比,ROI内TRAP阳性细胞数量无统计学差异(P>0.05)。对模型组ROI以高放大倍数(200倍)可观察到大量炎症细胞(包括浆细胞,巨噬细胞和多形核白细胞)浸润到种植体周围结缔组织中,而空白组和对照组几乎无炎症细胞浸润现象。模型组ROI中炎细胞的数量(36.67±9.074)与对照组(14.67±3.215)相比显著增高(P<0.05),空白组(10.67±2.082)与对照组相比,ROI内炎细胞数量无统计学差异(P>0.05)。模型组(4.23±0.51)牙龈组织中表达的NLRP3 mRNA的相对水平与对照组(1.29±0.41)相比显著增高(P<0.05)。当比较空白组(1.04±0.05)与对照组(1.29±0.41)时,这两组牙龈组织中NLRP3的mRNA相对表达水平无统计学差异(P>0.05)。模型组(2.84±0.59)牙龈组织中表达的IL-1βmRNA的相对水平与对照组(1.10±0.33)相比显著增高(P<0.05)。当比较空白组(1.07±0.07)与对照组(1.10±0.33)时,这两组牙龈组织中IL-1β的mRNA相对表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论:结扎诱导法成功建立种植体周围炎小鼠模型,NLRP3、IL-1β在模型小鼠牙龈组织中高表达,可初步判定其对种植体周围炎的发病具有促进作用。
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