论文部分内容阅读
研究目的：建立D-氨基半乳糖／内毒素(Galn／LPS)诱导的小鼠急性肝损伤模型,研究氢对急性肝损伤的保护作用；初步探讨其抗凋亡的机制,为进一步研究氢治疗相关疾病的作用机制提供科学依据。研究方法：通过腹腔注射D-氨基半乳糖／内毒素诱导成功建立小鼠急性肝损伤模型,建模后随机分组为生理盐水、N-乙酰半胱氨酸、氢盐水组,自动生化分析仪检测血清转氨酶水平,观察肝脏大体形态学改变,HE染色检测肝组织病理改变,采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL法)检测组织细胞凋亡情况,比较各组肝细胞凋亡率。用Real-time PCR(实时定量PCR)检测各组肝组织中P53及MDM2mRNA的表达。结果：(1)生理盐水对照组小鼠血清ALT值25.51±8.91U.L-1,AST值33.71±7.88U.L-1。D-氨基半乳糖／内毒素诱导建模后模型组ALT值为2314.34±327.47U.L-1,AST值为2219.26±423.23U.L-1。两组间比较有显著性差异(P<0.01)。造模后生理盐水干预组ALT值2415.26±326.28U.L-1,AST值为2529.26±415.12U.L-1；N-乙酰半胱氨酸组ALT值为356.90±121.95U.L-1,AST值为423.97±78.43U.L-1。两组比较间有显著差异(P<0.01)；氢盐水组ALT值为443.63±116.61U.L-1,AST值为363.92±114.39U.L-1,与生理盐水干预组比较有显著差异(P<0.01)；氢盐水组与N-乙酰半胱氨酸组无显著差异(P>0.05)。(2)肝大体形态学改变：生理盐水对照组肝脏形态正常,被膜光滑、完整、色泽红润、质地柔软。模型组肝脏明显肿胀,肝脏表面可见片状出血点,呈酱紫色,质地偏韧；建模后生理盐水干预组肝脏明显肿胀,淤血,肝脏表面呈酱紫色表面,质地偏韧；氢生理盐水组、N-乙酰半胱氨酸组：肝脏稍肿胀、充血,肝脏表面色泽发白。(3)组织病理学改变：生理盐水对照组：小鼠肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列,肝小叶结构完整,无病理改变;模型组：细胞坏死广泛而严重,细胞溶解,肝索解离,出现弥漫性的大片坏死,坏死区周围肝细胞发生不同程度的气球样变及嗜酸性变,小叶结构模糊不清,小叶内及汇管区有淋巴细胞和巨噬细胞为主的炎细胞浸润,残存肝细胞水肿变性。建模后生理盐水组：出现弥漫性的大片坏死,细胞溶解,小叶结构模糊不清,小叶内及汇管区有淋巴细胞和巨噬细胞为主的炎细胞浸润,残存肝细胞水肿变性,与模型组无明显变化。N-乙酰半胱氨酸干预组：肝小叶内血管扩张充血,出现轻微肝细胞肿胀、胞浆疏松,有散在炎性细胞浸润；氢盐水组：肝小叶中央静脉周围有点状坏死,散在炎细胞浸润及嗜酸小体形成。N-乙酰半胱氨酸、氢盐水干预后肝脏组织病理学得到明显改善。(4)小鼠凋亡细胞数：生理盐水对照组为3.51±1.21%,模型组为73.5±3.27%,两者比较有显著性差异(P<0.01)。建模后生理盐水干预组为72.5±4.27%,N-乙酰半胱氨酸组为45.3±2.24%,两组比较,有显著性差异(P<0.01)。氢盐水组为46.4±1.57%,生理盐水干预组与氢盐水组比较有显著性差异(P<0.01)。N-乙酰半胱氨酸组与氢盐水组比较无明显差异(p>0.05)。(5)P53mRNA的表达：(2-△△CtPP)：生理盐水对照组为0.1346土0.3476；模型组为1.0235土0.054；两者有显著性差异(P<0.01)。建模后生理盐水干预组为1.0564±0.0234, N-乙酰半胱氨酸组为0.5490±0.0657,两者有显著性差异(P<0.01)。氢盐水组P53为0.4395±0.0217,与建模后生理盐水干预组P53mRNA的表达有显著性差异(P<0.01)。氢盐水组与N-乙酰半胱氨酸组比较无明显差异(P>0.05)。(6)MDM2mRNA的表达(2-△△CtPP)：生理盐水对照组为0.3467±0.0123,模型组为0.1452±0.0424,两者比较有显著性差异(P<0.01)。建模后生理盐水干预组为0.1390±0.0453,N-乙酰半胱氨酸组为0.5490±0.0657,两者有显著性差异(P<0.05)。氢盐水组为0.4395±0.0217,与造模后生理盐水干预组比较有显著性差异(P<0.01)。N-乙酰半胱氨酸组与氢盐水组比较无显著性差异(P>0.05)。结论：(1)成功建立了D-氨基半乳糖／内毒素诱导的急性小鼠肝损伤模型。(2)氢盐水能显著改善肝损伤的血清酶学及病理改变。(3)氢盐水通过抑制P53mRNA的表达及增加MDM2mRNA的表达,降低肝损伤所致的细胞凋亡