慢病毒介导Period2低表达促进X线照射胶质瘤U343细胞凋亡的分子机制研究

来源 :宁夏医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liu716313
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目的体外研究生物钟基因Period2(Per2)的低表达对X线照射引起的胶质瘤细胞凋亡的影响及其分子机制。方法构建并合成Per2-shRNA、Control-shRNA(NC)慢病毒,将其感染p53野生型人胶质瘤U343细胞,应用嘌呤霉素筛选Per2低表达的shRNA-Per2细胞组及Control对照细胞组;给予6mV100cGy X线照射两组实验细胞,并分别于1h、12h、24h后,应用单细胞凝胶电泳技术检测两组U343细胞DNA的损伤情况、应用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测实验组细胞的凋亡情况,并应用RT-qPCR及Western Blot技术检测X线照射后两组U343细胞中与DNA损伤修复、细胞凋亡相关的基因ATM、p53以及c-myc等的表达情况。结果Per2-shRNA慢病毒明显下调生物钟基因Per2在人胶质瘤U343细胞中的表达;给予X线照射后,与Control细胞组相比,Per2低表达的shRNA-Per2细胞组DNA损伤更为严重,细胞凋亡率明显增加,且在X线照射后的1h、12h、24h,随着时间变化,shRNA-Per2细胞组的DNA损伤和细胞凋亡呈现出递增的趋势;此外,随Per2蛋白表达量的下调,ATM和p53的表达水平也明显减少,而c-myc的表达水平显著增加。结论下调生物钟基因Per2的表达可以增加人胶质瘤U343细胞对X线的敏感性;且Per2作为上游基因,通过调控ATM、p53、c-myc等的表达,减弱了它们在ATM-p53通路中对损伤DNA的修复作用,进一步促进了胶质瘤细胞U343的凋亡;这一研究也为后期临床靶向基因治疗胶质瘤打下了理论基础。
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