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胃癌(GC)的发病率和死亡率在我国各种恶性肿瘤中均位居前列,但其发病机制仍然不清。近年来,大量的研究发现:长链非编码RNA(lncRNA)的表达或功能异常与人类疾病包括癌症密切相关,但lncRNA是否参与胃腺癌的发生发展及其对患者预后的影响尚未清楚。我们在芯片测定获得结果的基础上,选择lncRNA HOXA-AS2作为研究对象,进一步研究其在胃腺癌组织样本中的表达状况;并通过转染针对lncRNA HOXA-AS2的siRNA,抑制其在胃腺癌细胞株中的表达水平,研究lncRNA HOXA-AS2表达降低后对胃腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,并寻找与鉴定其可能的下游分子,初步研究其与可能的下游分子Homeobox A4(HOXA4)的相关性。本研究的结果为进一步深入研究lncRNA HOXA-AS2与胃腺癌发生发展的关系奠定了基础。目的:研究lncRNA HOXA-AS2在胃腺癌中的表达及其表达水平与临床病理参数之间的相关性;初步探讨lncRNA HOXA-AS2对胃腺癌细胞生长增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响以及探究lncRNA HOXA-AS2发挥作用的可能的下游分子,为深入了解LncRNA在胃腺癌发病中的作用和机制奠定基础。方法:(1)采用人类lncRNAs表达谱芯片V3.0(Arraystar)检测从临床手术中取得的6对合格的胃腺癌组织与5cm外配对的癌旁正常组织中LncRNAs的表达、分析胃腺癌及配对的癌旁组织中存在的差异表达的LncRNAs,选取具有明显差异表达的lncRNA HOXA-AS2(差异倍数为3.067)(P<0.05)进行扩大样本量的验证:通过实时荧光定量PCR技术检测配对组织样本中lncRNA HOXA-AS2的表达是否与基因芯片中的表达趋势一致并分析其表达水平与患者临床病理特性、血清消化道肿瘤标志物之间的相关性。(2)通过分析lncRNA HOXA-AS2的全长序列,设计并合成两条针对lncRNA HOXA-AS2的特异性小干扰RNA(siRNA)片段,转染入胃腺癌细胞中,在胃腺癌细胞中验证其有效性。以不做任何处理的胃腺癌细胞(未转染细胞)为空白对照,以转染Scramble siRNA(乱序编码siRNA)的胃腺癌细胞为阴性对照,通过细胞划痕损伤试验、细胞增殖试验、细胞侵袭试验和细胞凋亡试验分析抑制胃腺癌细胞中lncrnahoxa-as2的表达后对胃腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。(3)检测lncrnahoxa-as2下游分子hoxa4的表达情况,分析其与lncrnahoxa-as2表达的相关性。结果:(1)组织及细胞水平验证lncrnahoxa-as2的表达:实时荧光定量pcr检测80例胃腺癌组织及配对癌旁正常组织样本,发现lncrnahoxa-as2在胃腺癌组织中的表达显著上调,与配对的癌旁组织比较,过表达率为:67.5%,p<0.05(平均上调倍数为5.7倍),与人类lncrna表达谱芯片v3.0(arraystar)检测结果相符;实时荧光定量pcr检测结果表明:与正常胃粘膜细胞株ges-1细胞相比,lncrnahoxa-as2在4株不同的胃腺癌细胞株中(sgc-7901、bgc-823、mgc-803和ags细胞)中的表达均明显上调,平均过表达倍数为3~6倍,差异具有统计学意义,p<0.05。进一步的分析显示lncrnahoxa-as2在胃腺癌组织中的上调与性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤大小(肿瘤最大直径)、淋巴结转移、神经侵袭和肿瘤浸润深度无关以及与患者血清cea、afp、ca19-9的浓度无关(p>0.05),而与脉管侵袭有关(p<0.05)。(2)功能研究:分别转染针对lncrnahoxa-as2的2个不同位点的sirna,有效地抑制了胃腺癌细胞中lncrnahoxa-as2的表达,抑制率均达50%以上;并显著地降低了胃腺癌bgc-823和ags细胞的增殖、显著地降低了胃腺癌bgc-823和sgc-7901细胞的迁移以及sgc-7901细胞的侵袭,与空白对照mock(未做任何处理)、阴性对照nc(scramblesirna转染)的对照组进行比较,差异均有统计学意义(p<0.05)。初步结果表明,抑制lncrnahoxa-as2的表达,对胃腺癌bgc-823的凋亡无影响,与对照组细胞比较,p>0.05。(3)下游相关分子的初步研究:通过ncbi数据库对lncrnahoxa-as2上下游分子进行检索,发现homeoboxa4(hoxa4)有可能是lncrnahoxa-as2发挥作用的下游分子,接着应用实时荧光定量pcr检测了hoxa4mrna在胃腺癌及癌旁组织中的表达水平,结果表明:hoxa4mrna在胃腺癌组织中的表达显著上调,上调倍数为3.86倍,且其mrna表达水平与lncrnahoxa-as2的表达水平显著相关(r=0.648,p=0.000)。结论:本研究的结果初步表明lncRNA HOXA-AS2在胃腺癌组织及胃腺癌细胞中呈上调表达,且lncRNA HOXA-AS2的上调表达与性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤大小(肿瘤最大直径)、淋巴结转移、神经侵袭和肿瘤浸润深度以及与患者血清CEA、AFP、CA19-9的浓度无关,而与脉管侵袭有关。抑制胃腺癌细胞中lncRNA HOXA-AS2的表达能抑制胃腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。HOXA4mRNA在肿瘤组织中呈上调表达,且与HOXA-AS2的表达呈显著的相关。这些结果表明:lncRNA HOXA-AS2可能通过影响胃腺癌细胞的增殖和迁移及侵袭,参与了胃腺癌细胞的发生和发展,HOXA4有可能是lncRNA HOXA-AS2发挥作用的下游分子;lncRNA HOXA-AS2有可能作为胃腺癌的分子标志物及治疗的新靶标。