沙门氏菌作为一种重要的食源性致病菌,广泛分布于生鲜乳生产的各个环节中。随着抗生素的不当使用,沙门氏菌耐药性日益严重,研究生鲜牛乳生产中沙门氏菌的分布、耐药性及来源,对保障公共卫生和食品安全具有重要的意义。本研究探求生鲜牛乳生产中沙门氏菌的耐药情况和污染来源,以期为生鲜牛乳生产过程的安全控制提供依据。采集山西某奶牛养殖区内外环境空气、挤奶间空气、牛鼻腔、圈舍围栏、牛肛门、挤奶器械、牛乳头、牛乳、饲料和粪便样本,通过增菌、选择性增菌、细菌分离纯化、染色镜检及hut基因扩增分离样本中的沙门氏菌;利用多重PCR技术对4种常见的血清型进行鉴定;测定分离株对14种抗生素的敏感性,并检测了13种耐药基因;利用PFGE技术对污染生鲜牛乳中的沙门氏菌进行溯源分析。结果表明:1、从一牛场生鲜牛乳生产各环节共采集896份样本,分离鉴定出199株沙门氏菌,检出率为22.21%,其中牛乳、挤奶间、奶牛养殖场样本的检出率分别为28.15%、14.91%、22.25%,除牛舍空气样本中检出2株沙门氏菌外,其它空气样本中均未检出沙门氏菌。2、通过多重PCR对199株沙门氏菌进行血清型分型,共鉴定获得鼠伤寒沙门氏菌30株,肠炎沙门氏菌24株,鸡白痢沙门氏菌3株,占比分别为15.08%、12.06%、1.51%,未鉴定出鸡伤寒沙门氏菌。3、根据美国CLSI标准测定沙门氏菌分离株对14种抗生素的敏感性,其中对氨苄西林的耐药率最高,耐药率为61.81%,其次是四环素、头孢唑林、复方新诺明,耐药率分别为54.27%、44.22%、38.69%,对美洛西林、头孢曲松、头孢噻肟、萘啶酸、环丙沙星、氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、链霉素的耐药率在4.02%～20.1%之间,未检出氧氟沙星耐药菌株;各环节沙门氏菌分离株多重耐药率为65.83%,多重耐药种数主要集中在2-4耐之间。4、对β-内酰胺类、四环素类、氨基糖苷类、磺胺类、氯霉素类、喹诺酮类的耐药菌株分别进行耐药基因的检测,其中β-内酰胺类耐药菌株中均检出blatem-1基因,但未检出blacmy-2基因;四环素类耐药菌株中tetA基因的检出率为52.78%,tetB基因的检出率为48.15%,tetG基因的检出率为39.81%;氨基糖苷类耐药菌株中aadA1基因的检出率为46.81%,aadA2基因的检出率为57.45%;磺胺类耐药菌株中均检出suIⅠ基因,而suIⅡ基因的检出率为31.17%,未检出suIⅢ基因;氯霉素类耐药菌中Cml A基因的检出率为4%,catⅠ基因的检出率为20%;喹诺酮类耐药菌株中qnr基因的检出率为28.57%。5、应用PFGE技术对各环节抽取的60株沙门氏菌进行同源关系分析,将其分为25种不同的PFGE型,各菌株间PFGE图谱的相似性为54%～100%,以相似性≥90%为界,将其分为8个基因型,其中牛乳样本分离株与牛鼻腔、圈舍围栏、牛肛门、牛舍空气、挤奶器械、牛乳头及饲料样本分离株的同源性在90%以上,粪便样本分离株与牛乳头、牛肛门及牛鼻腔样本分离株的同源性在90%以上,饲料样本分离株与牛鼻腔、牛肛门及牛乳头样本分离株的同源性在90%以上,圈舍围栏样本分离株与牛鼻腔和牛肛门样本分离株的同源性在90%以上。提示生鲜乳中沙门氏菌主要来源于奶牛养殖和挤奶环节,各环节中的沙门氏菌可通过直接接触和间接接触相互散播,造成生鲜乳的污染。