PGA37靶基因的鉴定及其功能研究

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lixin200513137149
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植物体细胞胚胎发生是一个复杂而有序的过程,人们在对其长期的研究中分离和鉴定了众多和体细胞胚胎发生有关的功能基因。PGA37是一个在胚胎和胚乳中特异表达的基因,它可能参与了合子胚胎的发生。由于PGA37编码一个R2R3-MYB转录因子,因此就需要鉴定和筛选出其下游的靶基因来进一步研究其功能。近年来,随着ChIP-chip、 ChIP-seq、ChIP-exo等高新技术的快速发展,寻找靶基因的技术也逐步成熟,但和传统的测序方法相比仍有许多局限性。本实验首先构建出PGA37-GR融合基因的转基因植物,通过地塞米松(DEX)的诱导使目的基因在特定时间特定情况下表达,以期筛选出其下游的靶基因。为了验证融合基因是否对PGA37自身的功能产生影响,本实验又分别从PGA37-GR转基因植物的表型、外植体再生情况以及分子水平上的表达谱进行分析。结果表明,PGA37-GR转基因植物在不同浓度DEX的诱导下表现出不同的抑制水平,且当DEX浓度为10μmol/L时,转基因植物幼苗发育受到严重抑制,说明融合基因没有影响PGA37抑制幼苗生长的功能。通过诱导PGA37-GR转基因植株的根外植体能够再生出体细胞胚胎,又检测其中PGA37基因的表达量也呈现一个较高的水平,说明融合基因并没有影响PGA37本身的功能。通过基因差异分析筛选出75个PGA37的候选靶基因,并对其中一个靶基因TOP1进行了克隆,构建了受35S强启动子驱动的TOP7过量表达拟南芥。通过对其表型的初步研究发现,该基因的过量表达并没有如预期的出现绿根,而是在开花期出现特殊膨大的雌蕊。叶绿体在胚胎发育中有规律地形成和消失为胚胎提供能量,确保胚胎正常的发育,但其调控机制尚不清楚。PGA37靶基因的成功筛选以及对部分靶基因功能的初步研究,对进一步了解PGA37的功能和揭示体细胞胚胎发生的机制奠定了基础。
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