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目的:通过观察电针对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱模型大鼠尿流动力学、膀胱逼尿肌组织形态学,逼尿肌内PACAP及其mRNA表达、cAMP含量,PKA及其下游收缩元件(MLCK、MLCP及MLC等)磷酸化的影响,并采用PACAP受体拮抗剂和PKA抑制剂,分别切断PACAP-cAMP-PKA信号通路的上游和下游转导通路,探讨电针治疗骶上脊髓损伤后神经源性膀胱的效应及其生物学机制。方法:第一部分实验,SD大鼠随机分为4组,即空白组、假手术组、模型组及电针组,采用改良Hassan Shaker法在T10-T11完全横断脊髓,制备骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠模型,以电针为干预手段,应用MP150多通道生理记录仪检测大鼠膀胱的尿流动力学,光镜下观察膀胱逼尿肌组织形态学变化。第二部分实验在第一部分基础上增加电针+PACAP6-38(PACAP受体拮抗剂)组,模型制备方法、电针方案及尿流动力学检测同第一部分,取膀胱逼尿肌组织,采用免疫组化和Western blot法检测PACAP38的表达,RT-PCR法检测PACAP38 mRNA的表达,ELISA法检测cAMP的含量。第三部分实验在第一部分基础上增加电针+H89(PKA抑制剂)组,模型制备方法、电针方案及尿流动力学检测同第一部分,采用ELISA法检测逼尿肌内PKA的含量,Western blot法检测逼尿肌内p-MLCK、p-MLCP及p-MLC的表达。结果:(1)造模后,与空白组及假手术组比较,模型大鼠的膀胱最大容量、膀胱顺应性均明显降低(P<0.01),膀胱基础压、漏尿点压均显著升高(P<0.01),膀胱逼尿肌的病理损害程度明显,说明造模成功;与模型组比较,电针治疗组大鼠膀胱的最大容量、膀胱顺应均显著增加,膀胱基础压、漏尿点压均明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(2)腹腔注射PACAP6-38和H89均能一定程度抑制电针对模型大鼠膀胱最大容量、膀胱顺应性的改善作用,与电针组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)电针次髎、中极、三阴交及大椎等穴位可上调膀胱逼尿肌内PACAP38及其mRNA的表达,升高cAMP含量,与模型组比较差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。腹腔注射PACAP6-38可抑制电针对cAMP含量的升高作用,但电针+PACAP6-38组cAMP含量与模型组及电针组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(4)电针次髎、中极、三阴交及大椎等穴位可提高膀胱逼尿肌内PKA、p-MLCK、p-MLCP的表达,降低p-MLC的表达,与模型组比较差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。腹腔注射H89可抑制电针对PKA、p-MLCK及p-MLC表达的上调或下调作用;电针+H89组PKA、p-MLCK表达与电针组比较差异均具有统计学意义(P<0.05),而与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)电针可明显提高骶上脊髓损伤后神经源性膀胱模型大鼠的膀胱最大容量及膀胱顺应性,降低膀胱内压,促进逼尿肌舒张,降低逼尿肌的病理损害程度,部分恢复膀胱的功能。(2)电针可通过上调骶上脊髓损伤后神经源性膀胱模型大鼠逼尿肌内PACAP的表达,增加逼尿肌内cAMP的含量,从而诱导逼尿肌舒张,改善膀胱功能。(3)电针可通过增加骶上脊髓损伤后神经源性膀胱模型大鼠逼尿肌内PKA的表达,提高逼尿肌内MLCK、MLCP的磷酸化,使MLC去磷酸化,抑制逼尿肌的收缩过程,从而发挥促进逼尿肌舒张,重建膀胱功能的效应。(4)激活PACAP-cAMP-PKA信号通路,调节膀胱逼尿肌内收缩元件的磷酸化,可能是电针重建骶上脊髓损伤后神经源性膀胱功能的重要途径。