目的：内皮型一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂非对称二甲基精氨酸(ADMA)是心血管疾病发生的重要危险因素，在冠心病病人血浆中浓度显著升高。我们假设一种新的eNOS增强剂AVE3085可以改善由ADMA导致的内乳动脉(IMA)内皮功能损伤，并通过相关实验验证。　　 先天性心脏病(CHD)是新生儿出生缺陷中最常见的一种。血浆蛋白质中可能存在大量疾病生物标志物。此外，全基因组连锁分析发现同源结构域亮氨酸拉链编码基因(HOMEZ)与南亚人群CHD易感性相关。我们通过实验鉴定CHD血浆相关生物标志物并在中国CHD患者HOMEZ基因中筛选潜在的致病突变。　　 方法：(1)对来自17例行冠状动脉搭桥(CABG)术病人的43个IMA血管环建立收缩-积累性舒张曲线，-8logM U46619诱导血管收缩，-11至-5logM乙酰胆碱(ACh)建立血管积累性舒张，在收缩前分别用ADMA(100μM)或ADMA(100μM)+AVE3085(30μM)孵育血管环。Western Blot检测eNOS的表达量。光泽精-增强化学发光法检测超氧阴离子(O2.-)的产生量。　　 (2)应用双向电泳(2-DE)和质谱分析的方法，分析法洛氏四联症(TOF)患者，室间隔缺损(VSD)患者和健康者相比血浆蛋白质的变化。候选蛋白与疾病的相关性应用ELISA法进行进一步确认。此外，对400例单纯性VSD患者和400例健康者进行HOMEZ基因编码外显子突变分析。HOMEZ基因编码外显子及部分侧翼序列经PCR扩增，ABI3730自动序列分析仪测定序列。CLCworkbench软件比较HOMEZ蛋白相应位点氨基酸多物种保守性。ExPASy-ProtScale在线工具分析氨基酸序列疏水性特征。Polyphen在线工具评估蛋白质结构和功能损伤。　　 结果：(1)与对照组最大舒张相比(35.3±5.0％)，ADMA孵育后-5logMACh诱导的IMA最大舒张显著降低(12.7％±2.3％，P<0.05)，AVE3085则可以一定程度恢复IMA的最大舒张(23.4±2.8％，P<0.05)。对照组中IMA的eNOS相对表达量为0.36±0.03，AVE3085(0.29±0.008，P=0.012)可以显著提高由ADMA导致的eNOS表达下调(0.05±0.04，P=0.014)。与对照组相比(0.51±0.102 RLU/s/mg)，ADMA还可诱导产生过量O2.-(2.97±0.25 RLU/s/mg)，而AVE3805可以明显抑制O2.-的产生(0.62±0.104 RLU/s/mg，P<0.05)。　　 (2)在TOF患者和VSD患者血浆中共找到18个差异表达的蛋白质点对应8种蛋白质。两种低表达的蛋白(Gelsolin，Ficolin-3)被选为候选蛋白采用ELISA法定量。TOF患者血浆Gelsolin浓度(76.30±4.42μg/ml，P=0.025，n=40)与对照组(131.80±23.46μg/ml)相比显著降低。TOF患者(4.930±0.355μg/ml，P=0.001，n=40)和VSD患者(5.548±0.343μg/ml，P=0.003，n=40)血浆Ficolin-3浓度与对照组(10.576±1.576μg/ml)相比也显著降低。在突变分析中，HOMEZ基因2号外显子的两个错义突变被检出(c.116 C>T；c.630T>A)。这两个突变分别导致HOMEZ蛋白氨基酸第39位由丙氨酸(Ala)变为缬氨酸(Val)，第210位有丝氨酸(Ser)变为精氨酸(Arg)，且这两个位点在多物种保守性分析中高度保守。变异后的氨基酸疏水性与野生型相比也发生明显变化。蛋白质结构和功能受到较大影响。　　 结论：(1)实验证明AVE3085可以通过增强eNOS的表达和抑制O2.-的产生逆转由ADMA导致的IMA内皮功能损伤。这一发现为冠状动脉搭桥术中的内皮保护开拓了思路，可用于提高搭桥血管的远期通畅率。　　 (2)我们首次描述了CHD患者血浆蛋白质的变化，其中部分蛋白质的变化可用于解释CHD患者凝血时间延长，易发生肺部感染等病理改变的机制。此外，我们在单纯性VSD患者HOMEZ基因编码外显子中检测到了两个错义突变，这说明HOMEZ基因很可能是中国单纯性VSD患者的一个致病基因。这些蛋白质和基因均为CHD的重要生物标志物。