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背景:转移是恶性肿瘤的重要生物学特征,并且是癌症患者死亡的主要原因之一。作为一种常见的恶性消化道肿瘤,胃癌具有很强的局部浸润和远处转移的能力,其转移早期以淋巴道转移为主,且其淋巴结转移的程度和范围是决定预后的重要因素。VEGF-C、VEGF-D是特异性淋巴管生成调节因子,以往研究较多关注在胃癌中VEGF-C、VEGF-D各自的表达情况,但对于胃癌及转移灶中VEGF-C/VEGF-D比值的表达情况及其与淋巴道转移相关性的研究,经检索国内外尚未见报道。因此,深入探讨VEGF-C/VEGF-D比值与胃癌淋巴道转移的关系,将有助于加深对胃癌发生、发展及转移机制的了解,为胃癌淋巴结转移的早期发现和预后评估找到指标。此外本课题组在前期工作中应用不同的方法,对Hca-F和Hca-P这一对具有高低不同淋巴道转移潜能的细胞株进行了系统的研究。筛选出一系列差异表达基因和蛋白质,发现CLIC1、ECH1在基因水平和蛋白质水平上,在Hca-F细胞的表达均显著高于Hca-P细胞。由于人类组织细胞中具有CLIC1、ECH1同源蛋白,且CLICS家族中的CLIC4可能位于VEGF的上游[1],因此我们也同时对胃癌中CLIC1、ECH1与VEGF-C/VEGF-D比值之间的相关性进行了探讨。目的:1、研究VEGF-C/VEGF-D比值、CLIC1、和ECH1在正常胃组织、无淋巴结转移的胃癌原发灶、有淋巴结转移的胃癌原发灶及淋巴结胃癌转移灶中的表达情况,以揭示三者在胃癌发生、发展及转移中的作用。2、分析比较VEGF-C/VEGF-D比值、CLIC1、和ECH1与不同性别、年龄、肿瘤大小、早中晚分期特别是与组织学类型、分化程度以及有无淋巴结转移的相关性。3、探讨在胃癌中VEGF-C/VEGF-D比值与CLIC1、ECH1表达的相关性,为进一步探索胃癌淋巴结转移的相关分子通路奠定基础。材料和方法:采用免疫组织化学方法检测VEGF-C/VEGF-D比值、CLIC1和ECH1在20例正常胃组织、44例胃癌组织、18例淋巴结胃癌转移灶中的表达情况;并对它们在不同性别、年龄、肿瘤大小、早中晚分期、特别是组织学类型、分化程度、淋巴结转移等临床病理因子的相关性做了探讨。44例胃癌中管状腺癌33例(高分化腺癌5例,中分化腺癌17例,低分化腺癌11例)、粘液腺癌6例、印戒细胞癌5例;胃癌中无淋巴道转移的胃癌原发灶21例、有淋巴道转移的胃癌原发灶23例。结果:1、胃癌中VEGF-C/VEGF-D表达强度的比值VEGF-C/VEGF-D表达强度的比值,在无/有淋巴结转移的胃癌原发灶中以及淋巴结胃癌转移灶中的平均值分别为0.91±0.52、2.14±2.80和1.13±0.97,均显著高于正常胃组织中的0.59±0.48,差异均有统计学意义(p<0.05);且在有转移组显著高于无转移组,差异具有统计学意义(p<0.05);在管状腺癌、粘液腺癌、印戒细胞癌中表达比值分别为1.72±2.39、1.00±0.69、1.15±1.13,三者间差异无统计学意义(P>0.05);在管状腺癌的高、中及低分化组中表达比值分别为0.90±0.17、2.02±1.81和0.61±0.33,在高、中分化组和中、低分化组间的差异均有统计学意义(p<0.05)。2、CLIC1在胃癌中的表达CLIC1在无/有淋巴结转移的胃癌原发灶、淋巴结胃癌转移灶中的表达强度的平均IOD值分别为45837.57±32324.15、29439.13±17430.89和33416.93±25356.04,均显著高于正常胃组织中的15471.90±18844.56,差异均有统计学意义(p<0.05);且在无转移组显著高于有转移组和淋巴结胃癌转移灶,其差异均有统计学意义(p<0.05);在管状腺癌、粘液腺癌、印戒细胞癌中的表达分别为36339.89±28134.89、31709.72±16764.54和53824.82±25026.29,各组间差异无统计学意义(P>0.05)。在管状腺癌的高、中及低分化组的表达分别为36393.69±20386.56、47317.93±32132.30、23631.67±16673.85,在中、低分化组间的差异有统计学意义(P<0.05)。3、ECH1在胃癌中的表达ECH1在无/有淋巴结转移的胃癌原发灶、淋巴结胃癌转移灶中的表达强度的平均IOD值分别9517.91±7151.79、14223.36±8106.63和7247.62±4743.59,虽都显著高于正常胃组织中的4113.31±3768.27,但只有在有转移组与正常胃组织间的差异有统计学意义且非常显著(p=0.000);ECH1在有转移组表达显著高于无转移组,差异有统计学意义(p<0.05);在管状腺癌、粘液腺癌、印戒细胞癌中的表达分别为11366.69±8237.49、17512.88±3136.41和9367.13±8077.58,在粘液腺癌中的表达显著高于管状腺癌和印界细胞癌,差异均具有统计学意义(P<0.05);在管状腺癌的高、中及低分化组中的表达分别为9248.25±8514.73、12217.15±7885.88和10545.46±8687.98,各组间差异无统计学意义(P>0.05)。4、VEGF-C/VEGF-D比值、CLIC1和ECH1的表达在各性别、年龄、肿瘤的大小及早晚期分组中的差异均无统计学意义(P>0.05);在有淋巴结转移的胃癌原发灶中VEGF-C/VEGF-D比值与CLIC1的表达强度呈负相关关系;与ECH1无相关性。结论:1、VEGF-C/VEGF-D表达比值升高与胃癌的淋巴道转移正相关,是有效判断和影响胃癌淋巴道转移的重要指标之一。VEGF-C、VEGF-D的变化是胃癌发生淋巴道转移的早期事件,且VEGF-D对VEGF-C/VEGF-D比值升高的贡献较大;在胃管状腺癌中VEGF-C/VEGF-D的表达比值在中分化组最高,其与胃癌不同分化程度相关。2、CLIC1在胃癌无淋巴结转移胃癌原发灶显著高于有转移的胃癌原发灶和淋巴结胃癌转移灶,表明其对淋巴道转移具有负调控作用;在胃管状腺癌中CLIC1的表达在中分化组最高,在低分化组表达最低,CLIC1与胃癌不同分化程度相关。3、ECH1在粘液腺癌表达最高,其与胃癌组织学病理分型有关;ECH1是促进胃癌发生淋巴道转移的重要基因之一。4、VEGF-C/VEGF-D在有淋巴结转移的胃癌原发灶中表达比值升高而CLIC1表达降低,二者呈负相关的关系,提示它们共同影响着胃癌的淋巴道转移;但在有淋巴结转移的胃癌原发灶中VEGF-C/VEGF-D比值与ECH1无相关性。