一、目的:阐明OPG/RANKL/RANK系统与去卵巢骨质疏松之间的关系,以及二至丸粗提液干预去卵巢骨质疏松模型鼠对此系统重要节点的调控作用,从OPG/RANKL/RANK系统方面探讨二至丸治疗PMOP的可能作用机制。二、方法:1实验动物分组、造模、模型鉴定、药物干预及取材在170只6月龄的SPF级雌性SD大鼠适应实验动物房环境的3天后,抽签随机分成去势组130只与假手术组40只。取2%戊巴比妥钠对实验大鼠作腹腔内注射麻醉(40mg/kg),在腹部正中部位作切口,去势组大鼠进行双侧卵巢结扎切除术,假手术组只未进行卵巢结扎切除术,其他操作步骤均与假手术组相同。术后12周,在去势组与假手术组中抽签随机各取10只大鼠做模型鉴定:麻醉之后取右侧胫骨测定并比较骨密度,取右侧子宫测定并比较其内膜厚度。模型鉴定成功后,将去势组抽签随机分成模型组、二至丸低剂量组,二至丸中剂量组和二至丸高剂量组各30只。均于术后的第13周开始灌胃给药,二至丸低剂量组给予二至丸6g/(kg.d),以生理盐水2ml溶解后灌胃:二至丸中剂量组给予二至丸9g/(kg.d),以生理盐水2ml溶解后灌胃;二至丸高剂量组给予二至丸12g/(kg.d),以生理盐水2ml溶解后灌胃;模型组与假手术组均只以2ml生理盐水灌胃,1次/日,连续12周用药,实验大鼠均在相同的条件下自由饮食,用药剂量均在与人体安全剂量范围对应的大鼠剂量范围内(约0-12g/(kg.d))。第16、20、24周各组抽签随机取10只大鼠,腹主动脉取血并离心,将血清分装到EP管中,-80℃冻存备测;取胫骨、腰椎,-80℃冻存备测。2、指标检测采用ELISA法测定血清OPG、TRACP、BGP与RANKL的含量。胫骨上端及腰椎下端作常规病理切片并HE染色,采用Motic Med 6.0数码图像分析系统测定骨小梁面积比,双能X线骨密度仪测定骨密度,三点弯曲法测定右胫骨生物力学最大载荷力,RT-PCR、Western blot法测定血清和骨组织中OPG、TRACP、BGP与RANKL基因及蛋白的表达水平。三、结果:1、去卵巢术后16-24周,同假手术组比较,模型组的骨密度、骨形态学和骨生物力学指标均下降(p<0.05),血清与骨组织中RANKL、BGP及TRACP的mRNA和蛋白均明显升高(p<0.05),OPG的表达降低(p<0.05)。随着术后时间的延长,RANKL、BGP及TRACP的增长幅度和OPG的降低幅度均有所减缓。2、去卵巢术后16-24周,同模型组比较,二至丸干预可明显提高去卵巢骨质疏松大鼠骨密度(p<0.05),增加骨小梁面积(p<0.05),提升骨生物力学性能(p<0.05),上调去卵巢SD大鼠血清和骨组织OPG的mRNA和蛋白的表达(p<0.05),抑制RANKL、BGP及TRACP的mRNA和蛋白表达(p<0.05)。随着用药浓度的增大和用药时间的延长,二至丸低中高剂量组血清和骨组织OPG的表达逐渐增加,RANKL、BGP及TRACP的表达逐渐降低。四、结论:在与人体安全剂量范围对应的大鼠剂量范围内:1二至丸可以提高去卵巢骨质疏松大鼠的骨密度、骨小梁面积与骨生物力学性能。2二至丸能调节去卵巢骨质疏松大鼠血清和骨组织OPG、TRACP、BGP与RANKL的异常表达,上调血清和骨组织中OPG的基因和蛋白表达,提高成骨细胞功能和骨形成,降低血清和骨组织RANKL的基因和蛋白表达,减弱破骨细胞活性和骨吸收,抑制血清和骨组织TRACP与BGP的基因和蛋白表达,降低骨代谢,发挥改善去卵巢骨质疏松的作用。