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当前临床麻醉上动物的品种繁多,不同动物品种及同一品种的不同个体间对于麻醉的敏感差异巨大,且老年动物手术对麻醉的要求更高。此种情况下,降低麻醉过深和苏醒延迟等临床手术麻醉常见的并发症具有显著临床意义和经济价值。与临床麻醉的催醒药物易产生毒副性和耐药性且用药条件谨慎相比,动物的水沟穴和尾尖穴有明显的催醒效果且电针具有价格低廉、操作简单的优点。本研究选取水沟穴和尾尖穴做为组合来探索电针对全麻新西南大白兔的催醒作用,在对最佳电针促醒参数组合筛选的基础上,从HPT轴、HPA轴、Orexin觉醒蛋白及其受体入手,使用最佳参数处理组对全麻兔“水沟-尾尖”组穴进行电针催醒处理,运用荧光定量PCR和酶联吸附反应相关分子生物学技术,分析兔HPT轴、HPA轴以及脑各区域Orexin前体及其受体的变化,来探讨电针穴位组合对麻醉催醒的机制。1.“水沟-尾尖”组穴电针最佳促醒参数的筛选本试验选使用速眠新对162只新西兰大白兔进行最佳参数筛选,随机分为27组,根据波形(连续波、断续波、疏密波)、频率(20Hz、40Hz、60Hz、80Hz、100Hz)、电流强度(4mA、8mA、12mA、16mA、20mA)做正交实验设计,设置25(n=6)组作为电针催醒组处理,设置一组自然苏醒组(n=6)和一组假针刺组(n=6)(只针刺不电刺激)作为对照组。以总苏醒时间为评分标准进行筛选。试验结果表明:电针处理参数为断续波/40Hz/4mA时,催醒效果最好。2.电针催醒对全麻兔的HPT轴、HPA轴作用本试验选取12只新西兰大白兔随机分为最佳电针参数处理组和自然苏醒组,分别于麻醉30min(施加电针处理时间点)、第一次翻正反射、完全苏醒3个时刻点采血并迅速分离血清,用酶联免疫吸附法测定血清中下丘脑-垂体-甲状腺轴(HPT轴)的促甲状激素释放激素(TRH)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺素(T4)含量和下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)的促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和肾上腺素(EPI)的含量变化,观测电针处理对全麻兔应激作用。试验结果表明:电针最佳参数处理组在麻醉30min、第一次翻正反射、完全苏醒三个时刻血清中HPT轴的TRH、TSH各时刻点差异不显著(P>0.05),T4在第一次翻正反射时下降,然后在完全苏醒时显著上升(P<0.05),但对比麻醉30min时,差异不显著(P>0.05);HPA轴的CRH、ACTH、EPI含量变化差异不显著(P>0.05)。电针“水沟-尾尖”组穴对全麻兔可能通过抑制HPT轴实现全麻催醒;HPA轴可能不参与电针催醒。3.电针催醒对兔脑Orexin前体和受体基因表达的影响本试验选取12只新西兰大白兔随机分为最佳电针参数处理组和自然苏醒组。在全麻兔电针催醒第一次翻正反射时同时处死两组兔,立即采集兔大脑皮层、小脑、海马、丘脑、脑干组织进行液氮冻存。采用qPCR技术对比两组兔各脑组织Prepro-orexin、OX1R、OX2R的相对表达量。试验结果表明:与自然苏醒组相比,电针处理组电针处理组Prepro-orexin mRNA相对表达量在大脑皮层、小脑、海马、丘脑、脑干均显著上升,上调表达为大脑皮层2.51倍,小脑2.77倍,海马2.44倍、丘脑1.44倍和脑干4.27倍;电针处理组OX1R相对表达水平在大脑皮层、海马、丘脑显著上升,上调表达为大脑皮层3.26倍,海马2.75倍,丘脑3.17倍;电针处理组OX2R相对表达水平在大脑皮层、海马、丘脑和脑干显著上升,上调表达为大脑皮层4.18倍,海马6.14倍,丘脑1.5倍和脑干2.34倍。电针“水沟-尾尖”组穴可能通过激活orexin觉醒系统实现催醒。全文结果表明,电针处理参数设置为断续波/40Hz/4mA时,催醒效果最佳;在此参数下,电针刺激通过抑制HPT轴产生相关激素的分泌及可能促进Orexin系统相关蛋白基因的合成,从而促进全麻兔的觉醒。