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脾虚泄泻证是兽医临床上常见疾病,也是许多疾病的一种综合证候,影响着全身多个脏器。现代医学上属迁延性、或慢性腹泻范畴。以便溏、腹泻、体质下降、倦怠无力、食欲减退和精神不振等为主要特征。其病因较为复杂,病程迁延难控制,且四季均可发生,对畜禽养殖业的健康发展造成较大的影响。目前,在临床上治疗该病多采用抗菌药物,抗菌药物的不规范使用甚或滥用现象常有发生,加重动物腹泻类病症频发的同时耐药性问题越来越严重,给动物健康带来极大危害。为此,临床兽医工作者提倡应用中草药制剂来防治该病,中药复方“苓术散”由茯苓、白术(土炒)、苍术(麸炒)、党参、陈皮、泽泻(盐炙)和炮姜组成,具有补益脾气、渗湿利水的功效,实验室前期临床实验证实该复方可有效防治动物脾虚泄泻证。为探讨其作用机理,本研究以大鼠为实验动物从肠道黏膜屏障入手探讨苓术散干预大鼠脾虚泄泻证的作用机制。第一,为明确“苓术散”干预治疗大鼠脾虚泄泻证的最佳疗效剂量,SD大鼠80只,随机分成空白对照组(10只)和造模组(70只),造模组采用“破气+苦下+饥饱失常”法复制脾气虚泄泻证模型,造模成功后,将造模组随机分为模型组、苓术散A组(40 g/kg·体重)、苓术散B组(20 g/kg·体重)、苓术散C组(10 g/kg·体重)、苓术散D组(5 g/kg·体重)、苓术散E组(2.5 g/kg·体重)和参苓白术散组(20 g/kg·体重)。分别在造模前后和药物干预14 d后观察所有试验大鼠临床表现并进行宏观评分,结果显示,造模后造模组大鼠宏观积分显著高于空白对照组(P﹤0.05);“苓术散”干预后各组大鼠宏观积分显著下降(P﹤0.05),其中苓术散B组与空白对照比较差异不显著(P﹥0.05)。表明苓术20 g/kg·体重的剂量干预效果最佳。第二,为探究“苓术散”对脾虚泄泻证大鼠肠黏膜组织结构的影响,将SD大鼠40只,随机分为空白对照组、模型组、苓术散组和参苓白术散。除空白对照组以外,其余三组大鼠均采用“破气+苦下+饥饱失常”法建立脾虚泄泻证模型。造模成功后苓术散组和参苓白术散组分别按20 g/kg·体重进行灌胃干预治疗,干预治疗14 d后采集各组大鼠血液和组织样品。计算各组大鼠胸腺和脾脏指数,采用间苯三酚法测定试验大鼠血清中D-木糖含量,酶联免疫法检测血清中DAO和D-LA的水平,并制作结肠石蜡切片观察结肠黏膜组织结构变化。结果显示,与空白对照组相比,模型组大鼠胸腺和脾脏指数、血清中D-木糖含量均显著降低(P﹤0.05),血清中DAO和D-LA水平显著升高(P﹤0.05),石蜡切片显示结肠黏膜上层脱落,完整性被破坏;苓术散干预后胸腺和脾脏指数、血清D-木糖含量显著升高(P﹤0.05),血清DAO和D-LA水平显著降低(P﹤0.05),结肠黏膜上皮再生,完整性得以恢复。表明“苓术散”可改善脾虚泄泻证大鼠肠道吸收功能,改善脾虚泄泻证大鼠肠道黏膜的损伤。第三,为进一步探究“苓术散”对脾虚泄泻证大鼠结肠黏膜免疫的影响。在试验二试验设计的基础上,分别采集模型组、空白对照组、苓术散组和参苓白术散组大鼠近端结肠2 cm,并采集肠黏膜并匀浆,离心后取上清液,采用ELISA法检测大鼠结肠黏膜中SIg A、IL-4、TNF-α和IFN-γ水平。结果显示,与空白对照组相比,模型组大鼠结肠黏膜SIg A、IL-4水平显著降低(P﹤0.05),TNF-α和IFN-γ的水平显著升高(P﹤0.05);“苓术散”干预后大鼠结肠黏膜中SIg A、IL-4水平显著升高(P﹤0.05),TNF-α和IFN-γ的水平显著降低(P﹤0.05)。表明,“苓术散”可调节脾虚泄泻证大鼠结肠黏膜免疫功能。第四,为进一步探究苓术散对脾虚泄泻证大鼠结肠紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin和ZO-1 m RNA相对表达量的影响。在试验二试验设计的基础上,分别摘取模型组、空白对照组、苓术散组和参苓白术散组大鼠近端结肠约2 cm,运用Trizol法提取总RNA,Quantitative real-time PCR法检测脾虚泄泻大鼠结肠中紧密连接蛋白claudin-1、occludin和zo-1m RNA的表达量。结果显示,模型组大鼠结肠中claudin-1、occludin和zo-1m RNA的表达量显著低于空白对照组(P﹤0.05),“苓术散”干预后claudin-1、occludin和zo-1m RNA的表达量均显著升高(P﹤0.05)。表明,“苓术散”可修复脾虚泄泻证大鼠结肠上皮细胞间紧密连接结构。综上所述,“苓术散”能降低脾虚泄泻证大鼠宏观积分,提升血清中D-木糖含量,恢复胃肠吸收功能;升高脾脏和胸腺指数,降低脾虚泄泻证大鼠结肠黏膜TNF-α和IFN-γ的水平,提高结肠黏膜IL-4、SIg A的水平,发挥免疫调节作用;有效改善脾虚泄泻证大鼠结肠黏膜组织损伤的修复,降低脾虚泄泻证大鼠血清中D-LA和DAO的水平,上调脾虚泄泻证大鼠肠黏膜Claudin-1、Occludin、ZO-1m RNA的表达量,从而降低肠黏膜的通透性,发挥保护肠黏膜屏障的作用。