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世界范围内，宫颈癌发病率和死亡率居女性恶性肿瘤的第二位。在我国，每年平均新发宫颈癌病例有13.15万，而且近年来发病有年轻化趋势。因此，宫颈癌的早期诊断一直广受关注。子宫颈上皮内瘤变(CIN)已公认为宫颈癌的癌前病变。然而，仅有其中的一部分会经长期演进最终发展为宫颈癌，大部分CIN可持续存在，甚至自然消退。单纯形态学检查往往无法确定CIN的预后倾向，随着分子生物学的进展，寻找有助于宫颈癌早期诊断的分子学指标正成为研究热点。 大量研究证实了高危型HPV感染在宫颈癌发生中起重要作用，同时也提示单纯HPV感染尚不足以引起宫颈癌，还需要其它分子事件的共同参与。抑癌基因的缺失或失活就是一个重要的发生机制。肿瘤等位基因缺失的检测分析为揭示肿瘤抑制基因提供了有效研究手段。分子遗传学研究发现宫颈癌及部分癌前病变在3号染色体短臂3p14-21区域存在高频率的等位基因缺失，提示该区域存在与宫颈癌发生、发展相关的抑癌基因。脆性组氨酸三联体(FHIT)基因是近年发现的定位于3p14.2区域的候选抑癌基因，研究发现人类许多恶性肿瘤，尤其是和环境致癌因素关系密切的恶性肿瘤中存在较高频率的FHIT异常。国外学者对FHIT基因在宫颈癌及CIN中的转录和表达进行了研究，然而对FHIT基因在宫颈癌发生发展中扮演的角色至今尚无定论。宫颈癌FHIT基因改变与表达之间的关系，FHIT基因失活的机制也少见有探讨。 本研究应用显微切割技术准确提取宫颈癌及CIN发展各阶段病变细胞，采用免疫组化、杂合性缺失分析的方法检测候选抑癌基因FHIT基因在宫颈癌及CIN组织中的基因改变及表达的规律，探讨FHIT基因在宫颈癌发病中的作用，以期 Q 2003年浙江大学硕士学位论文为宫颈癌的早期诊断和CIN恶性潜能的评估提供线索和依据。方法 选取浙江大学医学院附属妇产科医院2000年1月《001年12月间存档蜡块共 113例，包括 56例宫颈癌和 57例宫颈上皮内瘤变。宫颈癌包括鳞癌 42例、腺癌 14例。宫颈上皮内瘤变包括 CIN 15例、CIN 118例、CIN Ill 34例。所有病例术前均未接受放疗或化疗。 采用兔疫组织化学染色6P法）检测FHIT蛋白的表达。显微切割分离肿瘤组织，以同一病例正常组织为对照，选取2个微卫星多态性位点D351300和D3S1234，通过nR－变性聚丙烯酚胺凝胶电泳－银染法进行FHIT基因杂合性缺失分析。结果 1．子宫颈癌及以N组织FHIT蛋白的表达：56例宫颈癌中32例FHIT蛋白表达较正常粘膜显著减弱或缺失，低表达率 57儿 69％门9八2）的鳞癌和 21％u八4）的腺癌组织FHIT 蛋白表达减弱或缺失，鳞癌组低表达率显著高于腺癌组 （peo．of）。鳞癌组FHIT蛋白低表达见于70％（7／10）的I级癌、68％（13／19）的H级癌和69％u八3）的HI级癌；FK0分期I期、H期的FmT低表达率分别为 750（18／24），55％（6／11），FHIT蛋白表达水平与鳞癌分化程度及患者FIGO分期均未见明显相关性（HO．05）。57例CIN中13例表达较正常减弱或无表达，｛ 表达率 23％，显著低于浸润性鳞癌组的 69％（peo．01）。CIN，11，Ill组的低表达率分别为7％（1／15）、13％（／8）、32％（11／34），随病变级别升高低表达率呈上升趋势。CINIH 与CIN Ill间有显著性差异（WO．05）。7例伴发浸润癌的CIN Ill中4例FHIT低表达，低表达率较不伴发浸润癌的CINlll的26％为高，但无统计学差异（NO．05）。 2．子宫颈癌及CIN组织FHIT基因LOH分析：D351300和D351234位点杂合率分别为 82％和 86％。56例宫颈癌在两位点 LOH发生率分别为 36％和 33％，52％ Q6乃6）的宫颈癌组织至少在一个位点存在 LOH，其中 4例在两个位点均表现LOH。鳞癌和腺癌组的LOH率分别为64％（27／42），14％（2／14），h者有显著性差异（WO．of）。不同组织学分级宫颈鳞癌LOH率分别为1级60％（6／10），11 2 2003年浙江大学硕士学位论文级68％（13／1），Ill级62％（8／13）；不同FIGO分期患者为I期58％（14／24），11期73％（8／11），FHIT基因LOH与组织学分级和FIGO分期均不相关（HO，05）。57例MN在 D3S1300和 D351234位点 LOH发生率分别为 14％和 17％，14例至少在一个位点检测到 LOH，占 25兄 显著低于浸润性鳞癌组（HO．of人 CIN，11，111组的 LOH发生率分别为 0、13％（l／8）、38％（13／34），随病变级别升高 LOH率呈上升趋势。CINH 与CIN Ill间有显著性差异（WO．01）。 3．子宫颈癌及CIN组织FHIT蛋白表达与LOH的关系：71％免疫组化显示FHIT蛋白表达显著减弱或缺失的病例至少在一个位点存在LOH；81％存在FHIT基因LOH的病例FHIT蛋白低表达，FHIT基因LOH与蛋白表达之间显著相关（WO．of）。结论及