胡杨PeWRKYl基因及其启动子的克隆与功能分析

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WRKY转录因子家族是近年来研究较为广泛的转录因子,WRKY蛋白含锌指结构,其N端存在高度保守的WRKYGQK氨基酸序列,WRKY结构域能专一的与顺式元件W-box[(T)(T)TGAC(C/T]序列结合。目前研究发现,WRKY转录因子参与了植物生物与非生物胁迫应答反应及其信号转导、植物生长发育、形态建成及代谢调控等一系列生理活动。   本研究从胡杨中克隆得到了PeWRKY1基因,通过构建植物过表达载体,利用农杆菌介导方法转化烟草,得到8个转基因株系。用100mM的NaCl处理转基因烟草水培苗一周后,对照及转基因植株的净光合速率(Pn)和气孔导度(Gs)都有显著下降,回复处理三天后,转基因植株的Pn和Gs都有所回升,但对照组的Pn仍然保持继续下降趋势,暗示PeWRKY1在植物响应盐胁迫方面可能存在一定的作用。   从胡杨及灰杨中分别调取WRKY1基因的启动子进行序列分析发现,两者含有与植物抗逆相关的多种元件,同时,两者都含有一个W-box结构,表明该启动子可能受上游WRKY家族成员的调控。将两启动子构建到含GUS基因的载体并分别转入烟草,对其进行GUS组织化学染色发现:两种启动子都存在组织表达特异性,转胡杨WRKY1启动子烟草的根、茎维管形成层及叶肉细胞中都发现GUS活性,但转灰杨WRKY1启动子烟草的茎维管形成层并未发现GUS活性,且在根和叶肉细胞中表达量相对较低,表明两种启动子在响应植物逆境胁迫反应中可能存在功能性差异。
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