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目的:检测进展期胃癌原发灶及其转移淋巴结癌细胞中上皮型钙粘蛋白(E-Cadherin,E-Cad)及其mRNA表达,探讨E-cadherin与胃癌转移的关系,从而为胃癌分子水平的诊断、治疗提供依据及线索。
方法:采用免疫组化过氧化物酶标记链霉卵白素法(SP)观察比较E-cadherin在38例进展期胃癌原发灶及转移淋巴结癌细胞中的表达,同时用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测上述标本中E-cadherin基因水平的变化,采用Western-blot法和流式细胞学技术检测E-cadherin蛋白的表达量,并结合分化程度、组织学类型等临床病理因素进行综合分析。
结果:(1)E-cadherin免疫阳性产物为棕黄色颗粒,E-cadherin染色定位于细胞膜,即连续的细胞膜染色。在38例患者中,E-cadherin在肿瘤原发灶只有2例正常表达,36例不正常表达,异常表达率为94.7%,E-cadherin在转移淋巴结内癌细胞中再表达阳性率为21.1%(8/38)。E-cadherin在转移淋巴结癌细胞中的再表达与肿瘤细胞的分化程度密切相关,在高分化胃癌转移淋巴结癌细胞中再表达阳性率为41.2%(7/17),在中低分化胃癌转移淋巴结癌细胞中的表达阳性率为4.76%(1/21),二者差异显著(P<0.05);E-cadherin在转移淋巴结癌细胞中的再表达阳性率与胃癌肿瘤细胞的病理类型无关,在管状及乳头状腺癌再表达阳性率为22.72%(5/22),粘液腺癌的再表达阳性率为18.75%(3/16),两者之间无统计学意义(P>0.05)。(2)E-cadherin和β-actin引物的扩增基因片段经电泳和EB染色后可见清晰电泳条带,其扩增片段大小与所设计的大小完全一致,分别为252 bp、300 bp。E-cadherin mRNA在原发灶及转移淋巴结组织中的表达量分别为(0.737±0.010)和(0.745±0.009),两者比较有统计学意义。E-cadherin mRNA表达量相对值在中低分化及高分化转移淋巴结组织中分别是(0.741±0.008)和(0.750±0.011),两者比较有统计学意义。E-cadherin mRNA表达量相对值在管状及乳头状腺癌转移淋巴结中是(0.748±0.010),在粘液腺癌转移淋巴结中是(0.741±0.008),两者比较有统计学意义。(3)38例胃癌患者原发灶及转移淋巴结均检测到不同程度的E-cadherin蛋白表达。通过Optimas6.0蛋白印记分析软件对所有病例的蛋白条带进行分析后发现,E-cadherin在原发癌组织中的蛋白相对强度为5~112.8(58.9±27.5),转移淋巴结组织中蛋白相对强度为15~156.2(93.7±27.8),原发癌组织中E-cadherin蛋白表达相对强度低于转移淋巴结组织。在中低分化和高分化转移淋巴结中E-cadherin蛋白相对强度分别为15~107.2(84.6±25.79)、45~156.2(105.2±42.3),二者间蛋白表达相对强度差异具有统计学意义。在管状及乳头状腺癌转移淋巴结中E-cadherin蛋白相对强度为16~156.2(102.2±27.8),粘液腺癌转移淋巴结中E-cadherin蛋白相对强度为15~103.9(82.7±22.1),二者比较有统计学意义。(4)通过流式细胞仪检测胃癌原发灶及其转移淋巴结癌组织中E-cadherin蛋白表达量(X-Mode值)。原发癌组织中E-cadherin X-Mode值为(6.39±0.53),转移淋巴结组织中E-cadherin x-Mode值为(9.07±0.87),原发癌组织中E-cadherin X-Mode值低于转移淋巴结组织。在中低分化和高分化转移淋巴结中E-cadherin X-Mode值分别为(8.82±0.73)、(9.4±0.95),二者间X-Mode差异具有统计学意义。在管状及乳头状腺癌转移淋巴结中E-cadherin X-Mode值为(9.34.±0.86),粘液腺癌转移淋巴结E-cadherin X-Mode值为(8.65±0.70),二者比较有统计学意义。
结论:E-cadherin与胃癌的发生、发展和转移密切相关;胃癌原发灶E-cadherin表达降低,而在转移淋巴结中出现高的再表达阳癌性率,说明原发灶的形成是由于E-cadherin表达降低或缺失造成的,而癌细胞在转移部位的再聚集和生长与E-cadherin再表达有关。这可能是蛋白表达的动态调节过程。通过RT-PCR、western-blot和流式细胞学技术对E-cadherin在基因水平和蛋白水平的检测,揭示E-cadherin在转移灶中的再表达是由于基因突变造成的。同时E-cadherin的表达还与胃癌的分化程度和组织学类型密切相关,与肿瘤的大小和浸润深度无关。因此检测E-cadherin基因水平的变化对于临床上发现和治疗胃癌有重要的指导意义。