微流控技术制备HA微凝胶及其作为细胞载体的应用研究

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近年来,包覆细胞的三维微凝胶以其独特的优势在组织工程、再生医学和细胞治疗等领域受到越来越广泛的关注。针对传统水凝胶尺寸较大、粒径不均一等缺陷,本论文采用液滴微流控技术,以呋喃根和酪胺根改性的透明质酸(HA)为原材料,通过酶交联和点击化学的交联方式,制备了尺度均一、物理化学性能不同的三种HA微凝胶,并比较了这三种微凝胶包覆和释放细胞的性能以及对细胞活性的影响。本文首先利用软光刻技术制备了T型微流控芯片,然后对微通道进行了疏水改性并搭建了无菌液滴微流控平台。通过对光刻流程的优化、芯片结构的选择、不同分散相和连续相组成对水凝胶液滴形成影响的评价以及液滴的收集,选择出了最适合本体系的微通道结构和溶液体系,并通过调控连续相和分散相的流速,实现了对水凝胶液滴的制备以及粒径的控制;同时,通过酶交联反应(EC)、点击化学反应(DA)以及两种反应的结合(EC-DA),成功制备了三种物理化学性能(流变学性能、凝胶化时间、溶胀性能和降解性能)不同的HA微凝胶。其次,在构建无菌液滴微流控平台的基础上,利用已制备的三种微凝胶实现对ATDC-5细胞的包载;并评价了三种类型的微凝胶对细胞的包载和释放能力,结果表明,EC微凝胶和EC-DA微凝胶包载细胞的密度为十万、百万和千万级时,微凝胶均能稳定存在,而DA微凝胶在细胞包载的密度为百万以上时,由于凝胶时间过长,DA微凝胶发生融并;细胞活死染色结果显示长期培养的DA微凝胶中细胞活性最低,而EC微凝胶和EC-DA微凝胶则具有良好的生物相容性。酶降解结果表明,EC-DA微凝胶最难降解,EC微凝胶降解速率最快。综合考虑微凝胶的弹性模量、凝胶时间、包载细胞的活性以及降解速率,我们认为,三种微凝胶中EC-DA微凝胶是最理想的包载细胞的载体。
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