桦褐孔菌是一种在欧洲,特别是俄罗斯广泛使用的一种药食同源大型真菌,其有广泛的药用活性。经过长期的民间摸索,桦褐孔菌多糖被证实对常见的慢性疾病,如糖尿病,心脏病等有较好的疗效,特别是针对癌症,其对肝癌、肺癌、大肠癌等一系列癌症有着广泛的抗癌活性。然而,针对其抗癌活性多围绕体外开展,对于体内及分子层面的作用机制研究不足。世界范围内,乳腺癌的发病率逐年攀升,每年全球约有200万名女性被诊断为乳腺癌,其中60多万名患者死亡;相比于其他癌症,乳腺癌在女性恶性肿瘤类型中的发病率/死亡率最高。随乳腺癌相关分子机制研究的不断积累,靶向治疗逐渐成为治疗的关键手段。考虑到乳腺癌发生和预后的过程中,免疫应答是最重要的发起路径之一,因此,通过对肿瘤免疫应答的调节,增强其反应强度,可有效地缓解乳腺癌患者的临床症候。在肿瘤免疫的微环境研究中,针对一些相对稳健的细胞浸润模式的研究,会显著影响到肿瘤的诊断、生存结局方面的评估。此类基于组学数据和高通量数据分析的研究一般被称为免疫浸润相关的研究,可以把从关键基因到细胞水平以及到临床样本生存信息层面的信息加以连贯的分析,并可以对研究的样本以统计学分析方法做一定的筛选和评价。因此,本研究聚焦于桦褐孔菌多糖对乳腺癌免疫浸润的影响,围绕桦褐孔菌多糖对小鼠乳腺癌细胞株4T-1的体内活性开展研究。揭示桦褐孔菌多糖的抑癌机制和增强临床乳腺癌免疫疗法的效果。本课题以小鼠乳腺癌细胞株4T-1作为研究对象,首先利用生物信息学筛选出乳腺癌相关的免疫分子靶点,再应用转录组学的手段,考察桦褐孔菌多糖缓解4T-1鼠乳腺癌的机制,并交叉对比,筛选出的免疫相关分子靶点的变化趋势。最后,利用PCR及WB手段对小鼠肿瘤组织内上述免疫相关分子靶点的调控情况进行了深入的研究,拟确定桦褐孔菌多糖对于乳腺癌免疫浸润的影响。主要结果如下:1.野生桦褐孔菌多糖含量较高,使用热水浸提法可以获得粗多糖混合物13.6g,除杂后获得多糖3.2g,经过离子交换柱洗脱分离后,得到IOP1至IOP6共6个主要组分,多糖的总体回收率在89.2%。根据MTT实验获得的结果可知,桦褐孔菌多糖可以对人乳腺癌细胞MDA-MB-231及鼠乳腺癌细胞4T-1产生较好的抑制作用,其中以组分IOP-5的抑制效果最好,并筛选其参与后续的抗肿瘤实验。IOP-5对人乳腺癌细胞MDA-MB-231及鼠乳腺癌细胞4T-1的IC₅₀分别为294±55.7μg·mL^-1及214.5±32.1μg·mL^-1。2.实验从数据库内共获得了1094个BC患者数据。并获得了1399个与生存相关的免疫相关DEGs。本研究利用多变量Cox分析,利用上述DEGs建立起TAIG风险评价模型,依据研究结果可知,较高的TAIG水平意味着较低的临床生存率、较高的AJCC-TNM分期水平及晚期乳腺癌病理分期。同时发现,发现高TAIG组内,CD8⁺T细胞、记忆静止CD4⁺T细胞、M0巨噬细胞和M2巨噬细胞等的免疫浸润密度明显降低。而TAIG评分系统内的17个免疫相关基因中,PCDHGA2、SPIB、ADRB1、FLT3和NFKBIE是最为重要的免疫相关分子标记物。3.围绕转录组学的研究结果可知,桦褐孔菌多糖IOP-5可有效的抑制乳腺肿瘤在模型小鼠体内的生长。其会降低体内乳腺癌肿瘤的生长速度和最终的瘤重,且安全有效。同时,其抑癌活性同浓度正相关。以高剂量组为模型,共筛选出3135个差异表达基因,其中192个同免疫相关。同时,依据本研究建立的TAIG指数,筛选出同免疫浸润相关性较高的分子标记物包含:NFKBI（上调）,FLT3、ADRB1、SPIB及IFNE（下调）等5个。可将上述分子标记物视作桦褐孔菌多糖IOP-5抑制乳腺癌发生免疫浸润的核心分子标记物。4.桦褐孔菌多糖IOP-5能显著抑制鼠乳腺癌细胞4T-1的增殖能力,并呈浓度依赖关系。而其对乳腺癌免疫浸润的机制,是通过上调NFKBI,进而抑制NFKB信号通路。而其通过下调FLT3,ADRB1,NFKBI,IFNE的表达,调节乳腺癌免疫微环境,进而起到抑制肿瘤转移的作用。桦褐孔菌多糖对乳腺癌肿瘤免疫浸润的调控关系,同桦褐孔菌多糖IOP-5的浓度呈正比。