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溶菌酶是一种能够水解细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键的碱性酶。产溶菌酶的微生物是以对鸡蛋清溶菌酶不敏感的细菌为底物进行筛选的,微生物来源的溶菌酶与动植物来源的溶菌酶相比具有独特的优势,应用前景广泛。
本研究从广西各地取样,利用添加金黄色葡萄球菌的LB平板和PBS平板初步筛选,所得菌株摇瓶发酵,根据蛋白酶K处理发酵液前后的活力变化,确定筛选到一株产溶菌酶菌株sp.RJ-36b。通过生理生化鉴定和16SrDNA保守序列分析,鉴定其为白色链霉菌。
对菌株sp.RJ-36b进行紫外-LiCl复合诱变,25W紫外灯、诱变距离30cm、诱变时间90s,以H/C作为初筛标准,摇瓶发酵后测定粗酶液活力进行复筛,最终筛选到一株高产菌株sp.Y5-39,酶活力达到145u/mL,比出发菌株提高了34.2%。sp.Y5-39多次传代发酵,酶活力保持稳定,是一株良好的产溶菌酶菌株。
对菌株sp.Y5-39发酵条件进行优化,确定最佳产酶培养基及培养条件。优化结果表明,发酵培养基成分为蔗糖1.0%,酵母膏0.70%,蛋白胨0.65%,NaCl0.50%,CaCl20.015%,MgSO4·7H2O0.05%,发酵条件为发酵温度32℃、培养基初始pH7.5、摇床转速为200r/min、摇瓶装液量为60mL/250mL产酶最高,sp.Y5-39菌株产酶达到253u/mL。
酶学性质初步研究表明,溶菌酶最适作用温度为60℃,60℃保温40min相对酶活力保持95%以上。溶菌酶最适pH6.5,在pH4-10的环境中保持4h后,相对酶活力仍然都保持在70%以上,说明此酶在较宽的pH范围内,稳定性较好。