为满足人们对疾病早期诊断治疗的需求,实现分子诊断的低检测限、高灵敏度,其相应研究越来越多。本论文提出的分子诊断的新设想,方便快捷,是将含聚维生素C片段的复合纳米粒子和亚甲基蓝(MeB)相结合。首先充分利用纳米粒子的比表面积大等特性,实现检测体系中维生素C片段的累积,之后在信号放大中利用其还原性与亚甲基蓝相作用,从而实现对疾病标志物的定性定量检测,具体工作内容如下:1、聚合物材料的合成:采用可逆加成-断裂链转移(RAFT)聚合方法合成以聚维生素C和生物素末端修饰的聚乙二醇为亲水片段,聚苯乙烯为疏水片段的聚合物材料,并通过核磁共振和凝胶渗透色谱对其结构性质进行表征,聚合物PDI均在1.4以内,粒径分布较窄表明聚合可控。2、复合纳米粒子的制备:对其共自组装条件聚合物摩尔比和两相体积比进行优化,由激光粒度仪对其进行测试,制得粒径均一的复合纳米粒子。通过运用透射电镜和荧光分光光度计对其形态和稳定性进行表征,确定复合纳米粒子是具备核壳球形结构,粒径在160 nm左右。3、建立信号放大新体系:维生素C与过氧化氢作用生成氢氧自由基可使亚甲基蓝被还原,即体系颜色实现从蓝色到白色的转换,便于可视化观察;同时采用紫外分光光度计(UV)对体系作用条件进行优化,可实现复合纳米粒子对亚甲基蓝的定性定量检测。确立信号放大体系由复合纳米粒子-过氧化氢-亚甲基蓝组成,其中复合纳米粒子浓度和亚甲基蓝浓度为1:1,体系过氧化氢浓度为6%,作用时间为2 min。4、蛋白质的定性定量检测:制备纳米磁珠(MB),并通过红外光谱和透射电镜对其结构和形态进行表征。将信号放大新体系与免疫磁珠相结合,采用双抗夹心法,紫外分光光度计对其监测,完成对疾病标志物的识别检测,并且实现蛋白质检测从传统的孔板表面转换到在溶液中进行。该体系对人体免疫蛋白的检测范围是600-2000 ng/mL,检测限为400 ng/mL。