中国广东不同水体鱼鲺的形态学与分子分类研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:drake0266
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究从广东不同水体鱼鲺的流行病学调查入手,首先对鱼鲺的种类和地理分布、宿主类型、感染率和感染强度等展开研究;然后通过扫描电镜观察对所发现的15种鱼鲺进行了超微结构的研究,以便寻找新的分类标准;最后采用分子分类方法对来自不同国家的同一种鱼鲺(Argulus sp.)mtDNA三种基因(cox1,nad1和nad4)的遗传差异进行了研究。   为了对广东省鱼鲺分布进行全面调查,我们将本省划分成3大区27个点,以便精确地了解该研究范围内存在哪些鲺种。为了收集到各种环境的虫体,包括来自宿主的或水面游离的以及附在水下物体上的虫体,采样时我们运用了多种方法,如刺网,延绳钓,诱钓,浮游生物网,定置张网以及拖网捕鱼。然后参照Margolis等(1982)的公式计算出鲺的流行率,虫荷及鲺在宿主身上的平均密度和感染水平。结果显示,广东鲺的分布非常广泛,90%以上的水体中含有此虫。此外,本次调查共发现15种鲺,其中7种为中国新记录,14种为广东省首次报道。本次调查共收集1011个鱼鲺,其中65.77%来自感染鱼,29.67%是游离的虫体,4.54%来自水下物体,且雌鲺的数量几乎是雄鲺的两倍。其中日本鲺(A.japonicus),白鲑鲺(A.Coregoni),叶形鲺(A.foliaceus)占大多数,所调查的27个点都发现了日本鲺,总感染率为12.56%,最高感染强度为127。从不同的水体比较,171个鲺来自河流,其中蒙古鲺(A.mongolisnus)最多,数量为34个,占19.88%。314个鲺采自水库、湖泊和池塘,其中大鲺(A.major)有29个,数量最多,占9.23%。在没有经过处理的渔场鲺的数量和种类最多。鲺的宿主特异性尚不确定。鲺的感染率和感染强度主要受季节以及鱼的繁殖期的影响,在广东夏季是感染的高发季节。   采用XL 30扫描电子显微镜对鱼鲺的超微结构进行了观察。其方法有两种:一是先用无水乙醇对样本进行脱水,再于临界点下干燥,干燥后,虫体表面镀上金膜,采用扫描电子显微镜(SEM)观察;二是用蒸馏水将样本的粘液和碎片洗净,在4℃下用4%戊二醛磷酸缓冲液固定24-30h,然后用1%磷酸缓冲液洗脱,再用蒸馏水冲洗,最后采用环境扫描电子显微镜(ESEM)观察。结果发现广东省的鲺种存在明显差异,并揭示出一个新的可靠的分类标准,以往未曾发现或采用。本研究中我们首次利用ESEM描绘了12种鲺的超微结构特征,我们确信一些特征是以前用光学显微镜无法观察到的。比如第二触角丛(位置,数量,刚毛长度和形状,鞭节形状和范围),几丁质条形状(滴状,梳状,带几个尖头的叉状,折扇状或刷状)以及在第二上颚上的分布,棘的形状(指状,矛状和圆柱状),游泳足(有无鞭毛,分节和鳞片形状),第一颚杆的几丁质条形状(细长,卵圆形,有隔,含有横线),口前刺和游泳足的刚毛。这些特征都是鉴别虫种的理想指标。而且,副性交配器官的位置和结构,吸盘周缘上重叠几丁质条的数量和结构(基部几丁质条如花瓶状,圆锥状或杯状),雄性的黑色素斑,第二游泳足的结构,虫体的整体大小,都是用来区分雌雄鲺的最重要的标准。   在分子分类研究中,我们采用PCR技术对虫体线粒体DNA(mtDNA)的三个基因,即细胞色素C氧化酶亚单位1(cox1),NADH脱氢酶亚单位1和亚单位4(nad1和nad4)进行了扩增与测序,研究了来自中国、叙利亚和埃及三国日本鲺的遗传差异,通过MEGA 4.0利用mtDNA基因构建了日本鲺的第一个系统树。每个样品经SDS或蛋白水解酶K处理后,再进行纯化(Wizard SV基因组纯化系统),萃取其全基因组DNA。然后设计3对引物扩增虫体cox1基因部分序列(pcox1)、nad1基因和nad4基因部分序列(pnad1和pnad4),这些虫体来自中国、埃及和叙利亚的感染鱼。然后对其PCR产物进行测序。结果显示,cox1基因上A+T含量为68.8%-69%,nad1基因为77.1%-77.6%,had4基因为60.4%-60.9%。所有日本鲺中,在cox1基因上的序列变异为0.1.9%,nad1基因为0-2.3%,nad4基因为0-0.8%。不同河流的日本鲺在cox1基因上的序列变异为0.4.%-0.8%,nad1基因为1%-2.3%,nad4基因为0.4%-0.8%。而所有渔场的日本鲺在cox1基因上的序列变异为0.6%-1.9%,nad1基因为0-1.7%,nad4基因为0.2%-0.6%。所选的遗传标记中,nad1是变异最大的基因,nad4基因比cox1基因更保守。所有日本鲺的分离株都是A.ameTicanus在系统树上的姊妹株,且属于同一分支,来自中国和埃及渔场的分离株相距最近。然而,日本鲺个体间存在适度的遗传漂移和突变。这些发现证实所选的3个mtDNA基因为日本鲺种群遗传学的研究提供了便利,其中nad1基因是检测日本鲺序列变异的一种新的可靠的遗传标记。
其他文献
我们要从幼儿的兴趣入手,有目的地选择与幼儿生活经验、兴趣密切相关的美术材料、工具开展美术活动,对幼儿进行审美教育,满足幼儿的需要,使他们乐学,并促进他们想象力、创造
一、教学目标rn通过教学,使学生在轻松愉快的环境中,夯实基础,完成现在进行时的复习,并且培养学生学习英语的乐趣,启发学生将所学知识创造性的运用于实际,同时引导学生自主复
在经济全球化的大背景下,英语在国际上的重要性更加明显,我国对英语教学的提出了更高的要求和目标,不仅要求学生会英语考试,还要掌握听说读写的能力,全面提高英语技能.阅读也
随着教育机制的不断改革,教育服务理念和小学管理理念也在不断转变.转变教育观念、树立教育服务理念、建立新型师生关系、聚焦学校内涵发展、全面推进质量管理成为很多学校和
国家统计局1月20日发布的数据显示,中国产业结构调整取得历史性变化:第三产业(服务业)增加值占国内生产总值(GDP)比重2013年提高到46.1%,首次超过第二产业。初步核算,2013年
本刊讯(报道)近日,记者从江门海关获悉,亚太森博(广东)纸业有限公司获得海关AA类管理企业资格,这是银洲湖纸业基地首家获得海关总署AA类管理类别的企业。据了解,海关按照守法
小学数学教学对于学生的能力发展和素养的提升具有极其重要的影响.在实际教学的过程中,教师应该积极的引入现代教学思想,同时将其和实际教学情况有机的整合在一起,找到最适合
“汪洋社会,清正之窗”,这是安徽观众心目中的《社会之窗》。每星期三晚上收看电视台播出的这个节目,已经成了他们生活中的一个重要内容。在安徽某地,曾发生过这样的事情:当
干扰素(Interferon,IFN)是一种由细胞分泌的一族活性糖蛋白,具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节的作用。IFN-γ可以提高MHCⅠ和MHCⅡ分子的表达,促进CD8+T细胞、CD4+T细胞的形成和
教师在课堂教学中,要以学生为主体,充分发挥学生的主体作用,激发他们的学习兴趣,调动学习积极性,真正做到教师只是课堂教学的组织者、引导者,学生才是学习的主人.