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盐酸克伦特罗(Clenbuterol hydrochloride,CLB),俗称“瘦肉精”,是一种β2-肾上腺素受体激动剂。它可以分解动物的脂肪,加快新陈代谢,增加瘦肉量、提高饲料转化率,因此,常被用作生长促进剂添加到动物饲料中。然而,肉制品中残留的CLB,通过食物链进入人体后,能导致消费者的急、慢性中毒,尤其是在心血管和中枢神经系统。因此,需要建立一种快速、准确、灵敏的CLB检测方法。由于动物样品基质复杂,必须要经过样品前处理才能进行仪器分析。国标法检测CLB的样品前处理过程需要反复的溶剂萃取、超声、离心以及固相萃取净化等,步骤繁琐、费时、选择性差、易引入杂质,且需要使用大量的有毒、有害溶剂,已无法满足CLB检测分析的要求。磁性固相萃取(Magnetic solid-phase extraction,MSPE)是一种基于磁性吸附剂的固相萃取技术。它可以通过外加磁场直接分离样品中的磁性吸附剂,而不需要额外的离心、过滤等步骤,有效地缩短了分析时间,克服了传统固相萃取费时的问题。还原性氧化石墨烯/四氧化三铁(Magnetite/reduced graphene oxide,MRGO)纳米复合物,具有较高的吸附容量、容易回收利用等优点,把它作为一种新型的MSPE吸附剂,并与色谱仪器联用,可以实现复杂样品基质中目标物的分离或富集,提高方法的简便性、灵敏度和精确度。本文采用溶剂热法、水热法、共沉淀法制备了三种MRGO纳米复合物,并详细考察了不同方法制备复合物的差异;选择溶剂热法作为MRGO纳米复合物的最佳制备方法,优化了MRGO的制备条件;比较了6种猪肉样品前处理方法,确定了有效的前处理方法;以最佳的MRGO纳米复合物为MSPE的吸附剂,用于猪肉中CLB的萃取,建立了磁性固相萃取-高效液相色谱法(MSPE-HPLC)检测猪肉中CLB残留的方法。论文的主要内容如下:1 MRGO磁性纳米复合物合成方法及性能研究分别采用溶剂热法、水热法和共沉淀法制备了MRGO纳米复合物,并用FT-IR、XRD、SEM、TEM、Zeta电位仪表征和比较了不同MRGO的差异。结果表明不同方法制备的MRGO具有不同的表面官能团、四氧化三铁(Fe3O4)晶体结构和颗粒粒径、表面形态和表面电荷。同时,由于不同的MRGO具有不同的特性,它们对金属离子、染料、兽药也具有不同的吸附性能。共沉淀法制备的MRGO对阴离子具有较好的吸附性能,而溶剂热法制备的MRGO则对其他物质表现了较好的吸附和重复使用性能。因此,在实际应用时,应该根据检测对象选择适当的合成方法制备MRGO,并优化MSPE吸附和解吸条件,以达到最佳的萃取效果。2溶剂热法制备MRGO磁性纳米复合物及其表征采用改进的Hummers法制备了氧化石墨,同时优化了其制备条件,包括高温反应时间及石墨与高锰酸钾的质量比。然后以氧化石墨、Fe Cl3、DEG和Na OAc为原料,采用溶剂热法制备了MRGO磁性纳米复合物,并对溶剂热反应时间、Fe Cl3与氧化石墨的质量比进行了优化,最终制备了17种复合物。随后用FT-IR、XRD、SEM和TEM对不同复合物表面官能团、晶体结构、表面形貌和Fe3O4在石墨烯表面的分布状况进行了表征,以盐酸克伦特罗、磺胺嘧啶和阿莫西林为吸附对象,考察了不同制备条件对MRGO吸附性能的影响,最终确定石墨粉和高锰酸钾的质量比为1:2,高温反应时间为30 min,氧化石墨和氯化铁的质量比为1:1,溶剂热反应时间为8 h,此条件下制备的MRGO复合物表面颗粒负载均匀、颗粒粒径较小,具有巨大的比表面积,为MRGO对盐酸克伦特罗的检测奠定了基础。3 MSPE分析猪肉中盐酸克伦特罗的样品前处理方法研究采用了6种不同的方法来处理猪肉样品,然后以制备的MRGO为吸附剂,通过MSPE富集猪肉样品中的CLB,最后将样品进入HPLC分析,比较不同处理方法的处理效果,确定最佳的样品前处理方法是中华人民共和国农业行业标准NY/T468-2006。随后优化了样品前处理的条件如处理后的样品液的处理、乙酸乙酯提取次数和涡旋时间,确定用乙酸乙酯提取3次,涡旋30 s,然后将样品液旋转蒸发至干,用去离子水定容后,以MRGO对其中CLB进行萃取。4 MRGO在猪肉盐酸克伦特罗检测中的应用研究采用优化条件下制备的MRGO复合物为MSPE吸附剂,与高效液相色谱联用,建立了猪肉样品中CLB的检测方法。本文对影响MSPE萃取效率的条件进行了优化,包括MRGO用量、萃取时间、盐浓度、洗脱液类型及其用量。确定了最佳的萃取条件为:MRGO用量,15 mg;萃取时间,25 min;盐浓度,25%;洗脱液,甲醇;洗脱剂用量,3 m L。通过吸附动力学模拟,表明MRGO对CLB的吸附符合假二级动力学模型。随后,在最优条件下,对建立的MSPE-HPLC方法做出了评价,线性范围为1-100 ng/m L,线性相关系数为0.9995,相对标准偏差(RSD)为5.11%,检出限为0.542μg/kg,对猪肉中的CLB进行分析,三个加标水平下得到的回收率在87.38%-92.87%之间,富集因子在166.32-197.76之间。