峨眉髭蟾微卫星标记的筛选及其亲权鉴定

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亲权鉴定是研究动物婚配制度的重要手段。通过亲权鉴定,我们可以了解动物成体与子代之间的亲缘关系,从而了解该物种配偶选择的偏好、交配次数、抚育行为甚至适应性的性别比例等,并且对于濒危动物的保护具有一定的指导意义。目前在人类、哺乳动物、鱼类、昆虫和爬行类中关于亲权鉴定的研究较为丰富,而在两栖动物中的还相对较少,缺少相应的分子标记开发研究。本研究选取峨眉髭蟾(Leptobrachium boringii)作为研究对象,通过其转录组筛选并获得11个具有多态性的微卫星位点,并对2017年于湖南八大公山国家级自然保护区峨眉髭蟾繁殖场采集到的成体和子代样品进行亲权鉴定实验和数据分析,得到以下研究结果:1)运用在线简单重复序列识别工具(Simple sequence repeat identification tool,SSRIT)在峨眉髭蟾的转录组中查找得到117条四碱基重复SSR序列,通过温度梯度PCR等实验方法,进行引物及其扩增条件的优化,最终得到34对可稳定扩增的引物。在Genemarker 1.3中读取其基因分型并用GenePop 1.2检测哈温平衡和连锁不平衡,通过MicroChecker 2.2.3分析无效等位基因、大片段丢失等情况,最后根据Cervus 3.0计算其多态信息,最终得到11个具有多态性的微卫星位点。2)根据筛选得到的11个具有多态性的位点,对采集得到的305个成体(雌性148个、雄性157个)脚趾样和3,190个子代胚胎样进行DNA提取、PCR扩增以及STR扫描,将结果进行基因分型后用Cervus 3.0计算其遗传多样性:11个位点的等位基因数2-10个不等,每个位点的平均等位基因数为4.82个,每个位点的平均期望杂合度为0.5243,每个位点的平均多态信息含量为0.4635。根据亲权计算软件Colony 2.0.6.5分析得到:非父排除率是98.2%,在95团卵中,有77.3%的雄性有两团或两团以上的卵是它的子代,有33.3%的卵团具有多父权现象,表明峨眉髭蟾雄性参与了 2次及以上的繁殖活动,从而可以推测峨眉髭蟾的婚配制度为一雄多雌,同时同一卵团的多父权现象也为峨眉髭蟾雄性的卫星策略提供了一些分子证据。综上所述,通过转录组查找得到117条四碱基SSR序列,通过筛选最终获得1 1个具有多态性的微卫星位点,随后运用这11个具有多态性的微卫星位点对峨眉髭蟾95团卵进行亲权鉴定,结果表明峨眉髭蟾采用一雄多雌的婚配制度,并可能用雄性卫星策略提高其适合度。
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